• 【發(fā)布單位】國家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【發(fā)布文號(hào)】國食藥監(jiān)注[2005]493號(hào)
• 【發(fā)布日期】2005-10-14
• 【生效日期】2005-10-14
• 【失效日期】--
• 【文件來源】國家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【所屬類別】政策參考

預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則

預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則

(國食藥監(jiān)注[2005]493號(hào))





各省,、自治區(qū),、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：



 為規(guī)范疫苗研發(fā)行為，指導(dǎo)疫苗研究單位科學(xué)地開展研究工作,，根據(jù)《藥品管理法》、《藥品管理法實(shí)施條例》及《藥品注冊管理辦法》,，我局組織制定了《預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《生物制品生產(chǎn)工藝過程變更管理技術(shù)指導(dǎo)原則》、《聯(lián)合疫苗臨床前和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《多肽疫苗生產(chǎn)及質(zhì)控技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《結(jié)合疫苗質(zhì)量控制和臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《預(yù)防用疫苗臨床試驗(yàn)不良反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則》等6個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則，現(xiàn)印發(fā)給你們,，并請(qǐng)轉(zhuǎn)發(fā)轄區(qū)內(nèi)各有關(guān)單位,。



 國家食品藥品監(jiān)督管理局

 二○○五年十月十四日





 預(yù)防用疫苗臨床前研究技術(shù)指導(dǎo)原則



 前 言



 由病毒,、細(xì)菌或其他病原微生物為起始材料，經(jīng)培養(yǎng)增殖制成的減毒,、滅活的病原體,，或再經(jīng)純化、裂解,、亞單位（包括細(xì)菌類毒素）等方法處理制備的富含免疫原性,，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫學(xué)反應(yīng)而達(dá)到預(yù)防某種疾病的產(chǎn)品，為預(yù)防用疫苗,。



 本指導(dǎo)原則適用于用病毒,、細(xì)菌或其他病原微生物制備的預(yù)防用疫苗，其目的是為該類制劑提供一個(gè)共同的原則,，指導(dǎo)制定臨床前研究的方案,，和確定具體的研究內(nèi)容。



 一,、基本原則

 （一）應(yīng)符合國家《藥品管理法》等相關(guān)法律法規(guī)的要求,；

 （二）對(duì)所預(yù)防的疾病的流行情況進(jìn)行研究,包括疾病的危害程度 所涉及的人群及病原的型和亞型等；

 （三）對(duì)研制該類制品用于預(yù)防疾病的有效性,、安全性及必要性進(jìn)行分析,；

 （四）應(yīng)對(duì)該制品用于預(yù)防該疾病的利益風(fēng)險(xiǎn)比進(jìn)行研究。根據(jù)該制品的預(yù)防方案可能達(dá)到的效果及可能出現(xiàn)的副作用或危害,，對(duì)總體的利弊權(quán)衡進(jìn)行評(píng)價(jià),，并提出擬采取避免或減少其危害性或副作用的措施。這種評(píng)價(jià)將是該方案能否獲得批準(zhǔn)的重要依據(jù)之一,。



 二,、用于疫苗研究用的菌毒種

 研究疫苗所用的菌毒種必須證明為引起本病的細(xì)菌、病毒或其他病原體,，如該菌毒株分離自人體,，下述內(nèi)容必須清楚。



 （一）菌毒株名稱及來源：

 1．菌毒株名稱

 2．菌毒株來源

 （1）分離菌毒株的宿主一般情況,；

 （2）發(fā)病地點(diǎn),、發(fā)病日期；臨床確診日期,、實(shí)驗(yàn)室確診日期,；病人病程及病人轉(zhuǎn)歸。

 3．菌毒株分離原樣本： 咽試子,、漱口液,、痰液、血液、糞便,、尿液,、尸解標(biāo)本的組織名稱；取樣日期,；取樣時(shí)病人的病期,。

 4．鑒于人類的血液在同一時(shí)間內(nèi)較少感染多種病毒或細(xì)菌，而咽試子,、漱口液,、痰液、尿液,、糞便等樣品難免污染其他外源因子,，因此用病人血液分離的菌、毒株較適宜用于研究疫苗,。

 5．分離菌,、毒株的其他自然樣本名稱、來源,、數(shù)量,、取樣方法等。



 （二）菌,、毒株分離過程

 1．用細(xì)胞分離病毒,，所用細(xì)胞名稱、代次,、來源應(yīng)清楚,，應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞無菌檢測、支原體和外原因子等檢測,；病毒分離不宜使用腫瘤原性的細(xì)胞系,。盡可能使用非腫瘤原性細(xì)胞，如人二倍體細(xì)胞或Vero細(xì)胞等,。

 2．用動(dòng)物分離病毒,，對(duì)所用動(dòng)物名稱、品系,、級(jí)別,、年齡、接種途徑,、飼養(yǎng)條件和制備毒種的動(dòng)物臟器名稱等須詳細(xì)記載,；如再適應(yīng)到細(xì)胞，則還應(yīng)參照上述對(duì)分離用細(xì)胞的要求,。

 3．確定分離菌株所用培養(yǎng)基名稱、種類，以及分離培養(yǎng)的溫度和條件,。



 （三）菌,、毒株分離傳代特性

 應(yīng)包括樣品處理方法、首次盲傳確證菌毒株陽性代次,、菌毒株確證檢定方法,、每代培養(yǎng)天數(shù)、病毒滴度,、滴定方法,、動(dòng)物是否發(fā)病或死亡等資料。



 （四）菌毒種建立和保存

 應(yīng)包括原始菌毒種代次,、滴度,，添加的保護(hù)劑的名稱和濃度、存儲(chǔ)條件等資料,；原代菌毒種是指已適應(yīng)到可生產(chǎn)疫苗的細(xì)胞或培養(yǎng)基,，可穩(wěn)定傳代、保留抗原性,、并經(jīng)過檢定可用于疫苗生產(chǎn)的菌毒種,。種子批的建立應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》“生物制品制品檢定用菌毒種管理規(guī)程”的要求，應(yīng)對(duì)種子批進(jìn)行菌毒種的傳代和限定代次的研究,，以證明主種子和工作種子批在規(guī)定代次內(nèi)的生物學(xué)特性與原始菌毒種的一致性,。



 （五）菌毒種的檢定

 1．鑒別試驗(yàn)：可采用血清學(xué)、生物學(xué),、核酸序列分析等方法證明為該菌毒種,。明確該病原體及其它相關(guān)生物分子的基因序列及結(jié)構(gòu)，并與我國主要流行株的核苷酸和氨基酸同源性進(jìn)行分析以及明確其血清型,、亞型和/或基因型,，對(duì)該種基因型或血清型的流行情況進(jìn)行分析，若存在不同的血清型或基因型,，應(yīng)對(duì)所選擇的血清型或基因型與其它血清型或基因型交叉反應(yīng)或交叉保護(hù)性進(jìn)行分析和研究,。

 2．無菌檢查：按照現(xiàn)行版《中國藥典》的要求進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定,。

 3．外源因子檢查：按照現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求進(jìn)行,，應(yīng)符合規(guī)定，取樣量應(yīng)足夠檢測試驗(yàn)的需要,。

 4．?dāng)U增能力和感染性滴度：應(yīng)能達(dá)到按生產(chǎn)工藝要求順利生產(chǎn)合格疫苗的要求,。應(yīng)建立測定菌毒種擴(kuò)增能力和感染性滴度的方法和標(biāo)準(zhǔn)，并提供這些擴(kuò)增能力和感染性滴度與疫苗有效性之間的相關(guān)性數(shù)據(jù),。

 5．免疫原性檢查：菌毒種的免疫原性是衡量該疫苗是否有效的重要指標(biāo),，應(yīng)制定和建立測定菌毒種免疫原性的有效方法和標(biāo)準(zhǔn)，以評(píng)估該候選菌毒種能否進(jìn)行疫苗生產(chǎn)。

 6．減毒特性

 （1）如研制減毒活疫苗應(yīng)對(duì)原始菌毒株的生物學(xué),、血清型,、基因型和免疫原性進(jìn)行研究；減毒方法,、減毒過程,、減毒程度和減毒后的生物學(xué)、血清型,、基因型和免疫原性,，并進(jìn)行減毒前后的特性對(duì)比，尤其要對(duì)減毒后的安全性和免疫原性作出確切的結(jié)論,；

 （2）應(yīng)建立減毒特性指標(biāo)的驗(yàn)證方法,、動(dòng)物模型和減毒后安全性的標(biāo)準(zhǔn)以及檢測和警戒毒力回復(fù)的依據(jù)等；

 （3）對(duì)制備注射劑的減毒活疫苗,，除一般的外源因子檢測外,，還應(yīng)驗(yàn)證無逆轉(zhuǎn)錄病毒的污染。該驗(yàn)證方法可采用PERT法,；

 （4）如已知該病毒具有嗜神經(jīng)毒性,，其驗(yàn)證要求可參考《IABS Scientific workshop on neurovirulence test for live virus vaccines, WHO,31 January 2005》。



 三,、疫苗的生產(chǎn)工藝研究

 （一）建立菌毒種庫

 應(yīng)建立三級(jí)種子庫,。對(duì)種子庫的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行分析，明確該種子庫可以傳代的次數(shù),。生產(chǎn)用菌毒種,、細(xì)胞和涉及生產(chǎn)的工藝技術(shù)應(yīng)注意專利，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)專利查詢,。



 （二）生產(chǎn)用細(xì)胞和/或培養(yǎng)基

 1．生產(chǎn)用細(xì)胞應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》中“生物制品生產(chǎn)用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程”的要求,，如用傳代細(xì)胞系應(yīng)建立三級(jí)細(xì)胞庫；

 2．生產(chǎn)用培養(yǎng)基盡可能避免使用動(dòng)物來源和可能引起人體不良反應(yīng)的原材料,，禁止使用來自瘋牛病疫區(qū)的牛源性原材料,。



 （三）疫苗原液生產(chǎn)工藝的研究

 1．生產(chǎn)工藝的主要技術(shù)參數(shù)的確定

 （1）病毒與細(xì)胞的接種比例、MOI的最佳參數(shù),、細(xì)胞培養(yǎng)和病毒培養(yǎng)的最佳溫度,、培養(yǎng)時(shí)間和收獲時(shí)間。菌毒種的接種量,，培養(yǎng)和發(fā)酵條件等技術(shù)參數(shù)的研究確定,；

 （2）滅活劑的選擇和依據(jù)；

 （3）滅活或裂解條件及滅活或脫毒效果的驗(yàn)證,，滅活效果驗(yàn)證的依據(jù),、方法,；滅活效果的驗(yàn)證，應(yīng)采用盡可能敏感的細(xì)胞或培養(yǎng)基和方法進(jìn)行,；

 （4）原液的濃縮和/或活性抗原的提取純化等工藝研究：純化和提取工藝中各種條件進(jìn)行優(yōu)化,，純化和提取工藝對(duì)抗原活性成分是否影響，應(yīng)建立穩(wěn)定的純化工藝,，包括純化時(shí)的回收率、抗原活性和純度等的穩(wěn)定性,；并制定相應(yīng)的質(zhì)控指標(biāo)和檢測方法,，按GMP要求在符合GMP要求的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)；

 （5）初步確定起始投料,、原液,、半成品和成品的產(chǎn)出比的理論數(shù)據(jù)。

 2．疫苗對(duì)佐劑的要求

 目前能用于疫苗的佐劑多為氫氧化鋁,，而鋁佐劑通常使疫苗產(chǎn)生的抗體滯后,，且增加注射局部的副反應(yīng)機(jī)率。如疫苗的抗原能滿足免疫的需要,，則不加佐劑為宜,。如果在終制品中使用佐劑，則對(duì)以下問題應(yīng)進(jìn)行研究,，對(duì)于已經(jīng)明確有佐劑效應(yīng)或者已經(jīng)商品化的佐劑,，只需提供該類制劑的組分或化學(xué)組成，國內(nèi)外使用該類制劑的情況,，無需再進(jìn)行毒理和安全性研究,。若國內(nèi)外均未使用過該類佐劑,則必須對(duì)其作用原理、安全性及佐劑效應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究并建立切實(shí)可行的評(píng)價(jià)方法,。



 （四）疫苗的配方研究

 應(yīng)對(duì)疫苗的配方進(jìn)行研究,，如疫苗中添加的穩(wěn)定劑成分，緩沖液,、佐劑,、以及凍干疫苗的賦形劑成分等是否對(duì)疫苗造成影響。



 四,、藥理,、毒理和生物分布

 疫苗不同于一般的化學(xué)藥品，藥理,、毒理的實(shí)驗(yàn)要求具有特殊性,，因此，該制品的藥理學(xué)試驗(yàn)主要包括發(fā)生作用的原理,、生物效價(jià)與劑量的關(guān)系,、免疫程序和接種途徑與效果的關(guān)系等,；在毒理學(xué)方面主要考慮接種部位和全身的病理反應(yīng)、以及機(jī)體對(duì)該疫苗的非期望的免疫應(yīng)答反應(yīng)和這種反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間,。由于以上各方面是互相關(guān)聯(lián)的,，因此，應(yīng)綜合考慮藥理,、毒理和免疫原性或生物效價(jià)的因素,。



 應(yīng)建立適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)及檢測方法來評(píng)價(jià)疫苗的免疫原性或生物效價(jià)，如果有動(dòng)物模型或可建立動(dòng)物模型的,，可以采用動(dòng)物模型直接評(píng)價(jià)疫苗的生物效價(jià),，如：對(duì)一些有動(dòng)物模型的感染性疾病，可以采用病原體的攻擊實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)該疫苗的保護(hù)效果,。而且要建立劑量與生物效價(jià)的關(guān)系,，通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化免疫程序和接種途徑。若無法建立動(dòng)物模型,，應(yīng)建立能驗(yàn)證該疫苗有效性的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià),。



 滅活疫苗的生物分布較難檢測和評(píng)價(jià)。減毒活疫苗的生物分布應(yīng)建立敏感的動(dòng)物模型,，可測定接種疫苗后的病毒血癥（或菌血癥）以及持續(xù)時(shí)間,，排毒（菌）方式和途徑，對(duì)是否呈現(xiàn)體內(nèi)復(fù)制及感染的器官組織細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的研究,。



 五,、質(zhì)量控制及檢定的要求

 （一）生產(chǎn)過程中質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)的建立及要求

 在生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié)和步驟中的產(chǎn)品均應(yīng)建立相應(yīng)的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，以便后續(xù)工藝的進(jìn)行,保證產(chǎn)品的質(zhì)量,、工藝的穩(wěn)定性,。



 （二）產(chǎn)品的質(zhì)量檢定與要求

 1．外觀檢查：根據(jù)樣品的特征建立外觀的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

 2．pH值檢測：可根據(jù)一般生物制品的要求建立標(biāo)準(zhǔn),，一般為7.2±0.5,。

 3．純度：主要用于評(píng)價(jià)純化制品中含有有效成分的量和雜質(zhì)的最低限量，制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn),，通?？蓽y定有效抗原在疫苗中的絕對(duì)值或測定主要雜質(zhì)的量推算有效抗原在疫苗中的相對(duì)值。

 4．宿主細(xì)胞 DNA和蛋白殘留量檢測：采用傳代細(xì)胞生產(chǎn)疫苗,，應(yīng)限制疫苗中的宿主細(xì)胞DNA和蛋白殘留量,，進(jìn)行方法研究時(shí)應(yīng)建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品，并對(duì)檢測試劑的敏感性和特異性進(jìn)行驗(yàn)證,。疫苗中殘余宿主細(xì)胞DNA及蛋白殘留量可參考現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求,。

 5.無菌檢查：應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求。

 6．熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查：可參照現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求進(jìn)行,； 也可以用其它方法檢測疫苗中的熱原物質(zhì),。

 7．抗生素檢測：預(yù)防用疫苗在生產(chǎn)過程中不得添加青霉素或其他β內(nèi)酰氨類抗生素,；如在生產(chǎn)過程中添加除上述以外的其他抗生素，應(yīng)建立相應(yīng)的檢測方法并規(guī)定抗生素殘留量的要求,。

 8．滅活效果的驗(yàn)證：由于制備疫苗的病原體一般均對(duì)人類致病,，因此應(yīng)建立有效的滅活方法對(duì)該制品中的病原體進(jìn)行滅活，并應(yīng)對(duì)滅活效果進(jìn)行驗(yàn)證,；在成品檢定中應(yīng)建立滅活劑殘留量檢測的方法和限度標(biāo)準(zhǔn),。

 9．異常毒性檢查：應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國藥典》的相關(guān)要求。

 10．穩(wěn)定性試驗(yàn)：是指疫苗在常規(guī)保存溫度下的穩(wěn)定性試驗(yàn),。由于穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果直接與制品的效期有關(guān),，且試驗(yàn)觀察時(shí)間較長，因此應(yīng)在生產(chǎn)工藝確定后盡早留樣進(jìn)行,，定期取樣測定制品效力和其他相關(guān)的質(zhì)量指標(biāo)；對(duì)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果與加速穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析對(duì)比,，可為正式產(chǎn)品的有效期確定提供依據(jù),。

 11．效力試驗(yàn)（生物效價(jià)）：由于用于預(yù)防的疫苗是通過機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)發(fā)生作用的，因此應(yīng)評(píng)價(jià)其體液免疫和細(xì)胞免疫的生物效價(jià),。在評(píng)價(jià)體液免疫效價(jià)時(shí),，應(yīng)選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系，建立檢測動(dòng)物血清抗體的診斷試劑,，并對(duì)該類試劑進(jìn)行驗(yàn)證,，可以計(jì)算小鼠ED50以及抗體產(chǎn)生的滴度，如有必要和可行,，還應(yīng)當(dāng)建立評(píng)價(jià)抗體質(zhì)量的方法,，對(duì)抗體的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，如亞型測定及抗原中和位點(diǎn)分析等,；在評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫效價(jià)時(shí),，應(yīng)當(dāng)建立檢測評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫的方法（如特異性CTL反應(yīng)的方法或Elispot方法等），也可通過對(duì)細(xì)胞因子的定量檢測評(píng)價(jià)其細(xì)胞免疫情況,，如屬于常規(guī)檢定項(xiàng)目,，該類方法應(yīng)穩(wěn)定、重復(fù)性好,、可操作性強(qiáng),，并制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若有動(dòng)物模型,，可進(jìn)行動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn),。

 12．佐劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)：如最終制品含有佐劑，則應(yīng)建立佐劑含量以及與之結(jié)合率的檢測方法,，并制定相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),。

 13．疫苗標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的研究：對(duì)于一種新疫苗而言,，建立檢測疫苗的效力、免疫原性或毒性用標(biāo)準(zhǔn)品或參考品對(duì)判斷驗(yàn)室研究階段與批量投產(chǎn)后的疫苗質(zhì)量是否一致以及臨床試驗(yàn)的評(píng)價(jià)是非常重要的,。



 六,、臨床研究用樣品要求

 （一）申請(qǐng)臨床試驗(yàn)用的疫苗，按照國家GMP的要求,在符合現(xiàn)行中國藥品GMP的生產(chǎn)條件下生產(chǎn)的,。



 （二）臨床試驗(yàn)用疫苗樣品應(yīng)盡量使用與臨床前研究相同批的疫苗,其批量一般不少于1000人份,，并能滿足臨床試驗(yàn)對(duì)疫苗量的要求。



 （三）進(jìn)行臨床試驗(yàn)的疫苗必須由中國藥品生物制品檢定所進(jìn)行質(zhì)量復(fù)核,。