• 【發(fā)布單位】國家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【發(fā)布文號】國食藥監(jiān)注[2007]643號
• 【發(fā)布日期】2007-10-23
• 【生效日期】2007-10-23
• 【失效日期】--
• 【文件來源】國家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【所屬類別】政策參考

藥物非臨床依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

藥物非臨床依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則
 
(國食藥監(jiān)注[2007]643號)





各省,、自治區(qū),、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：



 為科學(xué)規(guī)范和指導(dǎo)藥物研究工作，國家局組織制定了《吸入制劑質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物口服緩釋制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥物非臨床依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》5個藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則,，現(xiàn)予發(fā)布,，請參照執(zhí)行。



國家食品藥品監(jiān)督管理局

二○○七年十月二十三日





藥物非臨床依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則



 一,、概述

 藥物依賴性是指藥物長期與機(jī)體相互作用,，使機(jī)體在生理機(jī)能、生化過程和/或形態(tài)學(xué)發(fā)生特異性,、代償性和適應(yīng)性改變的特性,，停止用藥可導(dǎo)致機(jī)體的不適和/或心理上的渴求。依賴性可分為軀體依賴性和精神依賴性,。軀體依賴性主要是機(jī)體對長期使用依賴性藥物所產(chǎn)生的一種適應(yīng)狀態(tài),，包括耐受性和停藥后的戒斷癥狀。精神依賴性是藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用所產(chǎn)生的一種特殊的精神效應(yīng),，表現(xiàn)為對藥物的強(qiáng)烈渴求和強(qiáng)迫性覓藥行為,。依賴性傾向可以在動物或人體的藥物研究過程中反映出來。

 軀體依賴與精神依賴可能同時存在,，也可能有分離,，如興奮劑通常表現(xiàn)為精神依賴，軀體戒斷癥狀并不明顯,。

 耐受性和敏感性（敏化）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)適應(yīng)性改變的兩種不同表現(xiàn)形式,。耐受性是指反復(fù)使用某種藥物以后，機(jī)體對藥物的敏感性降低,，需增大劑量才能產(chǎn)生原有的效應(yīng),。與耐受性相反，敏化是指在反復(fù)使用藥物以后,，機(jī)體對藥物的敏感性提高,，藥物的效應(yīng)增強(qiáng)。成癮藥物敏化現(xiàn)象表現(xiàn)為行為反應(yīng)和自主性覓藥動機(jī)增強(qiáng),。

 目前已知可產(chǎn)生依賴性的化合物主要有阿片類,、可卡因,、苯丙胺類、大麻類,、苯二氮卓類和巴比妥類及某些甾體激素類等,。

 本指導(dǎo)原則的目的，是為在藥物研發(fā)過程中進(jìn)行動物潛在依賴性研究時提供技術(shù)指導(dǎo),。非臨床藥物依賴性研究可為臨床提供藥物依賴性傾向的信息,，獲得的非臨床試驗數(shù)據(jù)有利于指導(dǎo)臨床研究和合理用藥，警示濫用傾向,。

 本技術(shù)指導(dǎo)原則適用于中藥,、天然藥物和化學(xué)藥等新藥的依賴性研究。

 二,、基本原則

 （一）實驗管理

 依賴性研究是藥物非臨床安全性研究的一部分,，根據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》，必須執(zhí)行“藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范”,。

 （二）具體問題具體分析

 中藥,、天然藥物和化學(xué)藥等的情況復(fù)雜，本文所提及的內(nèi)容不可能涵蓋所有中藥,、天然藥物和化學(xué)藥依賴性試驗的全部內(nèi)容,，依賴性研究應(yīng)遵循“具體問題具體分析”的原則。

 （三）整體性

 藥物的研發(fā)是一個連續(xù)的,、漸進(jìn)的系統(tǒng)工程,，依賴性試驗是藥物開發(fā)的一個有機(jī)組成部分。依賴性研究應(yīng)結(jié)合該受試物的藥學(xué),、藥動學(xué),、藥效學(xué)、一般藥理學(xué)及毒理學(xué)試驗結(jié)果綜合分析與評價,。

 （四）試驗設(shè)計

 試驗設(shè)計應(yīng)符合隨機(jī),、對照,、盲法和可重復(fù)性的原則,。

 三、基本內(nèi)容

 （一）適用范圍

 1,、與已知具有潛在依賴性化合物結(jié)構(gòu)相似的新的化合物,；

 2、作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),，產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛,、鎮(zhèn)靜、催眠及興奮作用的藥物,；

 3,、復(fù)方中含有已知較強(qiáng)依賴性成分的藥物,；

 4、直接或間接作用于中樞阿片受體,、大麻受體,、多巴胺受體、去甲腎上腺素受體,、5-羥色胺受體,、N-膽堿受體、γ-氨基丁酸受體,、苯二氮卓受體等受體的藥物,；

 5、已知代謝物中有依賴性成份,；

 6,、擬用于戒毒的藥物；

 7,、原認(rèn)為不具依賴性,，而在臨床研究或臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)有依賴性傾向的藥物。

 （二）受試物

 1,、中藥,、天然藥物

 依賴性試驗擬用受試物應(yīng)能充分代表擬臨床試驗受試物或擬上市藥品，因此該受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定,、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品,，并附有研制單位的自檢報告。一般采用中試樣品,，并注明受試物的名稱,、來源、批號,、含量（或規(guī)格）,、保存條件及配制方法等。如不采用中試樣品,，應(yīng)有充分的理由,。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進(jìn)行試驗,。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明批號,、規(guī)格及生產(chǎn)廠家。

 2,、化學(xué)藥物

 依賴性試驗的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定,、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，并注明受試物的名稱,、來源,、批號,、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等,，并附有研制單位的自檢報告,。所用輔料、溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號,、規(guī)格和生產(chǎn)廠家,，并符合試驗要求。

 （三）試驗系統(tǒng)

 1,、選擇試驗系統(tǒng)的依據(jù)

 為了獲得科學(xué)有效的依賴性信息,，應(yīng)選擇最適合的動物模型或其他試驗系統(tǒng)。選擇試驗系統(tǒng)的因素包括試驗系統(tǒng)的藥效學(xué)反應(yīng),，如敏感性,、特異性和重現(xiàn)性；受試物的背景資料,，如藥效學(xué),、藥代動力學(xué)等特點；試驗動物的種屬,、品系,、性別和年齡等。如果選擇特殊的試驗系統(tǒng),，應(yīng)說明原因,。

 2、實驗動物

 常用實驗動物包括小鼠,、大鼠,、猴等，一般情況下選用雄性動物,，必要時增加雌性動物,。通常選用大、小鼠,，對于高度懷疑具有致依賴性潛能的藥物,，而嚙齒類動物試驗結(jié)果為陰性，則應(yīng)選擇靈長類動物,。動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求,。

 3,、離體試驗系統(tǒng)

 離體試驗系統(tǒng)可用于支持性研究（如研究藥物的活性特點和作用機(jī)理）,。常用離體試驗系統(tǒng)主要包括：離體器官、組織,、細(xì)胞,、亞細(xì)胞器,、受體、離子通道和酶等,。

 （四）給藥劑量

 依賴性研究應(yīng)在一個較寬的劑量范圍內(nèi)進(jìn)行,，可根據(jù)不同的試驗方法和目的選擇不同的給藥劑量。一般采用主要藥效ED50的倍數(shù)遞增或最小有效劑量的倍數(shù)遞增,，同時結(jié)合藥物的溶解性,、毒性及對運動功能、學(xué)習(xí)能力和記憶能力的影響來設(shè)計劑量,。每個試驗至少應(yīng)設(shè)三個劑量組,。

 （五）給藥途徑

 原則上給藥途徑應(yīng)和臨床一致，盡可能增加靜脈給藥途徑,。由于模型的選擇或者考慮到以后可能的非臨床濫用的不同給藥途徑,，也可考慮增加其他給藥途徑。

 （六）對照組

 應(yīng)設(shè)立陽性對照和溶媒對照組,，如受試物需采用特殊的溶媒溶解,，還應(yīng)增設(shè)空白對照。如果受試物為較純的單一化合物,，與其母核結(jié)構(gòu)類似的化合物具有明顯的依賴性,，則還應(yīng)選擇此化合物為陽性對照藥。

 （七）試驗要求

 藥物依賴性研究一般包括神經(jīng)藥理學(xué)試驗,、軀體依賴性試驗和精神依賴性試驗三部分內(nèi)容,。

 1、神經(jīng)藥理學(xué)試驗

 如有早期的體外依賴性試驗,，所獲陽性試驗結(jié)果還應(yīng)通過體內(nèi)研究來進(jìn)一步確認(rèn)（除1.1的情況外）,。可利用神經(jīng)藥理學(xué)方法,，對行為學(xué)效應(yīng)和神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行測定,，初步判斷受試物有無依賴性傾向，這些內(nèi)容可通過藥效學(xué)試驗,、一般藥理學(xué)試驗或毒理學(xué)試驗進(jìn)行觀察,，具體方法不再列出。

 1.1 一般情況下,，充分揭示藥物的藥理特性之后,，還需要進(jìn)行進(jìn)一步潛在軀體依賴性和精神依賴性的研究。同時出現(xiàn)下述三種情況除外：

 （1）在有效濃度范圍內(nèi),，藥物與依賴性相關(guān)的分子靶點無相互作用,，或者雖然觀察到藥物與相關(guān)靶點的結(jié)合，但這種結(jié)合不會引起相應(yīng)的功能變化。

 （2）體內(nèi)研究結(jié)果未顯示出潛在依賴性,。

 （3）未發(fā)現(xiàn)此藥物具有可能與依賴有關(guān)的新的作用機(jī)制,。

 1.2 當(dāng)潛在依賴性的類別和程度已經(jīng)從體外試驗中充分暴露出來（例如一個完全μ受體激動劑），就不需再進(jìn)行進(jìn)一步的研究,。

 1.3 如果發(fā)現(xiàn)此藥物有可能與依賴有關(guān)的新的作用機(jī)制,，則需要作進(jìn)一步的研究。

 2,、軀體依賴性試驗

 各種有依賴潛力的藥物產(chǎn)生軀體依賴癥狀不同,，沒有理想的反映軀體依賴性的單一指標(biāo)，所以需要多種指標(biāo)來綜合評價,。生理指標(biāo)可采用體重,、體溫、呼吸,、攝食量等,；在行為學(xué)試驗中，可采用反映運動功能,、學(xué)習(xí)能力,、記憶能力和動機(jī)行為改變的指標(biāo)。指標(biāo)選擇的標(biāo)準(zhǔn)為：適宜在給藥前,、給藥期間和給藥后進(jìn)行動態(tài)觀察,，從而有利于描述機(jī)體產(chǎn)生的耐受及敏化的程度、特征及發(fā)展過程,。

 2.1 方法

 評價藥物軀體依賴性的一般試驗方法有三種：自然戒斷試驗,、催促戒斷試驗、替代試驗,。無論是自然戒斷還是催促戒斷,，動物都會出現(xiàn)一系列程度不同的表現(xiàn)，但不是所有戒斷癥狀在一個受試動物身上都能出現(xiàn),。由于每種方法觀察的指標(biāo)都不相同,，可結(jié)合藥效學(xué)、一般藥理學(xué)表現(xiàn)選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。結(jié)合我國的具體情況,，可以采用：

 小鼠自然戒斷試驗

 小鼠催促戒斷試驗

 大鼠自然戒斷試驗

 大鼠催促戒斷試驗

 大鼠替代試驗

 小鼠替代試驗

 猴自然戒斷試驗

 猴催促戒斷試驗

 也可采用其他的方法，但需加以說明,。

 2.2 戒斷反應(yīng)觀察主要注意事項

 a.給藥劑量,、頻率和周期應(yīng)該使動物產(chǎn)生神經(jīng)適應(yīng)性反應(yīng)。

 b.戒斷反應(yīng)的觀察應(yīng)該有足夠時間和頻度,，并且注意給藥前后的自身比較,。

 c．自然戒斷和催促戒斷兩種方式都需進(jìn)行,，但可在不同動物模型上進(jìn)行。

 d.盡可能采用儀器檢測的客觀指標(biāo),。

 e.有依賴性的藥物在戒斷后往往表現(xiàn)出反跳現(xiàn)象（急性藥理學(xué)作用相反的癥狀）,，在選擇觀察指標(biāo)時加以注意,。

 3,、精神依賴性試驗

 具有精神依賴性的藥物能促使用藥者周期性或連續(xù)性地出現(xiàn)感受欣快效應(yīng)的用藥渴求，但這是一種主觀體驗,，只能間接用藥物所導(dǎo)致的動物行為改變來反映,。常選用的方法有：自身給藥試驗、藥物辨別試驗,、條件性位置偏愛試驗,、行為敏化試驗。

 3.1 方法

 猴自身給藥試驗

 大鼠自身給藥試驗

 大鼠條件性位置偏愛試驗

 小鼠條件性位置偏愛試驗

 大鼠藥物辨別試驗

 小鼠行為敏化試驗

 大鼠行為敏化試驗

 也可采用其他的方法,，但需加以說明,。

 3.2 精神依賴性研究主要注意事項：

 c.在自身給藥試驗中需要注意藥物毒副作用相關(guān)的無應(yīng)答期（動物表現(xiàn)出覓藥行為之前的一段時間）、增加劑量的時間點和替代的程序,。

 d.自身給藥試驗中,，盡可能結(jié)合軀體依賴性試驗結(jié)果，設(shè)計合適的劑量,，并至少變換三次劑量,。

 e.在條件性位置偏愛實驗中應(yīng)使用平衡的實驗設(shè)計，避免動物天然傾向性影響,。

 4,、體外依賴性試驗

 （八）依賴性研究項目的選擇

 為了獲得足夠的藥物依賴性信息，藥物依賴性研究內(nèi)容的選擇需要參考藥效學(xué),、一般藥理學(xué)及其他毒理學(xué)試驗結(jié)果,，同時至少應(yīng)進(jìn)行軀體依賴性試驗（自然戒斷和催促戒斷）和一項精神依賴性試驗。有強(qiáng)烈精神活性并擬用于改變精神神經(jīng)活動的藥物,，應(yīng)有靈長類動物試驗數(shù)據(jù),。

 （九）依賴性研究的階段性

 1、對于可能存在依賴性的單一化合物：

 體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究應(yīng)該在Ⅰ期臨床試驗前完成,。在早期非臨床或臨床研究中觀察到的安全性信息可以為進(jìn)一步非臨床依賴性研究提供參考,。更進(jìn)一步的軀體依賴性和精神依賴性試驗觀察應(yīng)在Ⅱ期臨床試驗開始前完成。必要時需進(jìn)行體外試驗和依賴性的機(jī)理探討,。

 2,、對于中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑：

 中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑成份復(fù)雜，作用靶點多,，體外試驗結(jié)果參考意義有限,。體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究結(jié)果對于判斷是否具有依賴性有一定的意義,，但其結(jié)果的評價往往有較大的難度和局限。體內(nèi)依賴性試驗應(yīng)作為中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑依賴性考察的主要方法,。

 對于需進(jìn)行藥物依賴性研究的中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑,，應(yīng)在Ⅱ期臨床開始前提供全面的體內(nèi)依賴性試驗的相關(guān)數(shù)據(jù)。

 （十）結(jié)果分析與評價

 在對所得到的非臨床試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與評價時,，一般應(yīng)從以下幾方面進(jìn)行考慮：

 1,、統(tǒng)計學(xué)差異與生物學(xué)差異的問題。統(tǒng)計學(xué)差異可判斷受試物對考察的試驗結(jié)果是否存在影響,，但由于樣本數(shù)的限制,，有時可能掩蓋真正的生物學(xué)差異，故樣本數(shù)應(yīng)足夠充分,，同時,，還應(yīng)注意對每個樣本試驗結(jié)果進(jìn)行分析。對于統(tǒng)計學(xué)上的差異,，還應(yīng)結(jié)合動物的正常反應(yīng)加以分析,。

 2、陽性藥的選擇,。盡可能選擇結(jié)構(gòu)相似和/或作用機(jī)理相似的合適陽性藥,。

 3、對動物異常行為出現(xiàn)的時間,、持續(xù)時間及作用強(qiáng)度的觀察,。

 4、所選擇的動物是否合適,，模型是否可靠,。

 5、分析所選擇指標(biāo)的靈敏性,、特異性和可靠性,。

 6、對具體試驗結(jié)果進(jìn)行評估及整體評估,。

 7,、比較產(chǎn)生依賴性的劑量與有效劑量、中毒劑量的關(guān)系,。

 8,、分析是否存在耐受性，及耐受與依賴的關(guān)系,。

 9,、根據(jù)藥物擬定的適應(yīng)癥、有效性,，綜合分析繼續(xù)進(jìn)行臨床研究的可行性,。

 總之,，在對藥物潛在依賴性風(fēng)險評估中，應(yīng)充分利用所有的非臨床研究數(shù)據(jù),，并結(jié)合藥學(xué),、藥理學(xué)和臨床研究信息，進(jìn)行科學(xué)客觀的分析和綜合評價,，以判斷是否具有潛在依賴性,。

 四、參考文獻(xiàn)

 藥物依賴性試驗,，新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué),、藥理學(xué),、毒理學(xué)）,。中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，1993:219-221

 藥物依賴性試驗,，徐叔云主編,，藥理實驗方法學(xué)，第三版,，人民衛(wèi)生出版社,。北京，2002：251-258

 Guideline on the Non-Clinical Investigation of Dependence Potential of Medicinal Products. EMEA, 2006

 五,、附錄

 （一）軀體依賴性試驗

 1,、小鼠跳躍試驗（催促戒斷試驗）

 （1）原理：短期內(nèi)重復(fù)大劑量給藥，然后注射阿片受體拮抗劑,，如受試物屬于阿片類藥物,，則動物發(fā)生跳躍反應(yīng)，跳躍次數(shù)可反應(yīng)依賴性程度,。

 （2）動物：健康小鼠,。

 （3）實驗步驟：藥物劑量常按遞增法，有時也配合采用恒量法,，給藥總量可按鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計算,。連續(xù)給藥數(shù)天（根據(jù)藥物鎮(zhèn)痛作用的強(qiáng)弱確定給藥時間），末次藥后2h（以嗎啡為例）腹腔注射納絡(luò)酮,，觀察30min內(nèi)的跳躍動物數(shù)及跳躍次數(shù),，還可觀察1h內(nèi)的小鼠體重減輕程度。

 2,、大鼠體重減輕試驗（自然或催促戒斷試驗）

 （1）原理：阿片類藥物的戒斷癥狀出現(xiàn)后,，大鼠體重減輕，但非阿片類鎮(zhèn)痛藥和鎮(zhèn)靜催眠藥則無明顯作用,。阿片類戒斷后大鼠體重急劇下降,，以戒斷后24-48h最明顯,，是考察阿片類身體依賴性的較好指標(biāo)。

 （2）動物：健康大鼠,。

 （3）實驗步驟：自然戒斷試驗每天早,、晚相同時間測定大鼠體重，每次測重后按體重給藥,，每天2-3次,，連續(xù)給藥數(shù)周（不少于4周）。劑量根據(jù)LD50和ED50及給藥途徑制定,。原則上低劑量應(yīng)高于藥效學(xué)有效劑量,，高劑量應(yīng)盡可能高，但不能出現(xiàn)毒性反應(yīng),。末次給藥后每天測量體重2-3次（與給藥次數(shù)相同）,，計算平均值，比較停藥前后不同時間的體重變化,。催促戒斷試驗以劑量遞增法給藥,，連續(xù)給藥1周，末次給藥后2h注射拮抗劑,，在2h內(nèi)每隔30min測量體重1次,，比較體重下降百分率。也可同時觀察大鼠給藥后行為變化和體溫及自發(fā)活動的變化情況,，并以第1次給藥至反復(fù)給藥1周內(nèi)為重要,。

 （4）結(jié)果評價：如戒斷后大鼠體重急劇下降，則反應(yīng)受試物具有身體依賴性,。

 3,、大鼠替代試驗（替代試驗、交叉軀體依賴性試驗）

 （1）原理：阿片類藥物都有基本相同的藥理作用,，給動物阿片類藥物并使之產(chǎn)生身體依賴性后停藥,，代之以受試物，觀察動物是否發(fā)生戒斷癥狀,。

 （2）動物：健康大鼠,。

 （3）實驗步驟：摻食法連續(xù)給以嗎啡使動物產(chǎn)生身體依賴性，5天后以生理鹽水,、嗎啡或不同劑量受試物代替,，每8h給藥1次，連續(xù)6次,。替代前（基礎(chǔ)值）及替代后每隔4h測定體重1次,，計算各組大鼠的體重變化，比較替代藥物組和嗎啡依賴組之間的差異,。

 （4）結(jié)果評價：按等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計,，比較達(dá)到同樣替代程度的受試藥的劑量和嗎啡的劑量,，可以確定受試藥物的身體依賴性潛力的強(qiáng)弱程度。對體內(nèi)代謝迅速,、皮下給藥不易形成依賴性的藥物,，用摻食法誘發(fā)依賴性可以獲得較明確的結(jié)果。

 4,、大鼠攻擊試驗（自然或催促戒斷試驗）

 （1）原理：大鼠對阿片類藥物形成依賴性后停藥或用拮抗劑催促,，可發(fā)生戒斷癥狀，易與同籠大鼠發(fā)生相互攻擊（一般停藥后72h最明顯,，24h時極不明顯,；具有間斷性的特點，可連續(xù)幾小時甚至幾天）,。

 （2）動物：健康大鼠,。

 （3）實驗步驟：按遞增劑量給藥，連續(xù)數(shù)天,，如有依賴性,，則停藥后大鼠出現(xiàn)體重減輕,、搖體,、眼瞼下垂及扭體等戒斷癥狀；此時如將大鼠同居一籠,，則出現(xiàn)嘶叫,、對陣和相互攻擊現(xiàn)象，甚至受傷致死,。一般于停藥后第3天進(jìn)行試驗（將動物同居一籠）,，觀察1h，記錄對陣時程和嘶叫,，以及攻擊和互咬次數(shù),。

 (4)結(jié)果評價：本試驗可反應(yīng)嗎啡成癮后腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能。停藥后戒斷癥狀是多巴胺功能亢進(jìn)的表現(xiàn),，多巴胺受體激動劑可增強(qiáng)攻擊反應(yīng),。所以注意排除藥物對多巴胺功能的干擾所產(chǎn)生的假陽性或假陰性。

 5,、戒斷癥狀的記分評定（自然或催促戒斷試驗）

 （1）原理：動物長期獲得阿片類藥物后,，其中樞神經(jīng)系統(tǒng)能產(chǎn)生一種適應(yīng)狀態(tài)，停藥或注射拮抗劑后機(jī)體出現(xiàn)一系列生理干擾現(xiàn)象即戒斷癥狀,。對這些戒斷癥狀的輕重程度進(jìn)行綜合評分即可判斷藥物的身體依賴性潛力,。

 （2）動物：常用大鼠和猴。其中阿片類藥物在猴上的依賴性表現(xiàn)與人較接近,，戒斷癥狀比較明顯且易于觀察,。

 （3）實驗步驟：按劑量遞增法并配合恒量法給藥,，也可用拮抗劑納絡(luò)酮催促戒斷。自然戒斷或催促戒斷后觀察一系列戒斷癥狀,，根據(jù)戒斷癥狀的嚴(yán)重程度和持續(xù)時間進(jìn)行綜合評分,。

 （4）結(jié)果評價：

 戒斷癥狀的綜合評分目前尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，可對戒斷癥狀進(jìn)行全面綜合評分,，也可對其中主要戒斷癥狀進(jìn)行綜合評分,。猴戒斷癥狀可分為輕、中,、重,、極重4個等級，每一等級的評分可根據(jù)癥狀種類的多少和出現(xiàn)的頻率定分,，但不能大于級差分值,。

 依賴性潛力的大小可依據(jù)等效依賴性劑量來判斷，即產(chǎn)生近似依賴狀態(tài)的劑量來判定,，也可按相同的等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)劑量來比較,。

 本方法同時也可進(jìn)行替代試驗?？稍谧匀换虼叽俳鋽嘣囼炛杏^察,。

 附錄（二）精神依賴性試驗

 1、自身給藥試驗

 （1）原理：藥物的精神依賴性可產(chǎn)生對該藥的渴求,，對覓藥行為和用藥行為具有強(qiáng)化效應(yīng),。本試驗?zāi)M人的行為，通過壓桿方式來獲得藥物,，反映藥物的強(qiáng)化效應(yīng),，可信度較高且可進(jìn)行定量比較。

 （2）動物：常用大鼠和猴,。

 （3）實驗步驟：

 動物麻醉后無菌條件下行靜脈插管并用馬甲背心固定,，連接彈簧保護(hù)套及轉(zhuǎn)軸，彈簧套內(nèi)硅膠管與插管相連,，轉(zhuǎn)軸使動物在籠內(nèi)能自由活動,，轉(zhuǎn)軸另一端與恒速注射泵及儲藥系統(tǒng)相連。術(shù)后常規(guī)抗感染,，恢復(fù)4-7天后進(jìn)行踏板訓(xùn)練,，使動物形成穩(wěn)定的自身給藥行為。試驗過程中注意保持套管暢通,。如藥物具有強(qiáng)化效應(yīng),，動物經(jīng)過短期訓(xùn)練后產(chǎn)生穩(wěn)定的自身給藥行為，能自動踩壓踏板接通注藥裝置將藥物注入體內(nèi)。

 （4）結(jié)果評價：

 通過觀察是否形成自身給藥行為來判斷藥物是否具有強(qiáng)化效應(yīng),；由于動物個體差異較大,，建議將每只動物自身給藥前后踏板次數(shù)變化的百分率進(jìn)行組間統(tǒng)計。

 本試驗中也可同時進(jìn)行替代試驗,。

 通過更換受試物的劑量,，比較它們在等效ED50倍數(shù)劑量條件下的踏板次數(shù)或比較產(chǎn)生類似踏板模式的藥物劑量，即可反映受試物的精神依賴性的強(qiáng)度,。

 本試驗設(shè)計適用于靜脈給藥,，實驗中應(yīng)注意藥物穩(wěn)定性和配藥時間的關(guān)系。如受試藥為口服給藥,，則不需進(jìn)行手術(shù),，而僅將每次踏板的反應(yīng)變?yōu)榻o一次口服制劑即可。

 2,、大鼠藥物辨別試驗

 （1）原理：依賴性藥物使人產(chǎn)生的情緒效應(yīng)如欣快,、滿足感等，屬于主觀性效應(yīng),。具有主觀性效應(yīng)的藥物可以控制動物的行為反應(yīng),，使之產(chǎn)生辨別行為效應(yīng)。本試驗可準(zhǔn)確判斷受試物是否屬于阿片類藥物,，以及產(chǎn)生精神依賴性潛力大小,。

 （2）動物：常用大鼠。

 （3）實驗步驟：

 利用辨別試驗箱和訓(xùn)練程序訓(xùn)練動物正確壓桿,，然后通過辨別訓(xùn)練訓(xùn)練動物產(chǎn)生穩(wěn)定準(zhǔn)確地辨別嗎啡和生理鹽水的能力,。最后進(jìn)行替代試驗，以不同劑量嗎啡和受試物進(jìn)行替代,，觀察壓桿正確率與劑量之間的關(guān)系，做出劑量-效應(yīng)曲線,，求得藥物辨別刺激的半數(shù)有效劑量（ED50,，值越小精神依賴性潛力越大）。

 （4）結(jié)果評價：

 藥物辨別刺激ED50值越小反映精神依賴性潛力越大,；如替代藥物不產(chǎn)生訓(xùn)練藥物反應(yīng),，則說明該藥不屬于嗎啡類藥物。本試驗不適用于阿片類拮抗劑,。由于藥物辨別刺激并非完全基于藥物濫用產(chǎn)生,，因此在評價藥物精神依賴性潛力方面不如自身給藥試驗可信，但在藥物主觀效應(yīng)強(qiáng)度的定量比較方面有其優(yōu)越性,。由于動物訓(xùn)練周期較長（一般3-4個月）,，試驗中要注意耐受性的產(chǎn)生。

 3,、條件位置偏愛試驗

 （1）原理：根據(jù)巴甫洛夫的條件反射學(xué)說,，如果把獎賞刺激與某個特定的非獎賞性條件刺激如某特定環(huán)境反復(fù)練習(xí)之后,，后者便可獲得獎賞特性。反復(fù)幾次將動物給藥后放在一個特定的環(huán)境中,，如藥物具有獎賞效應(yīng),，則特定環(huán)境就會具有了獎賞效應(yīng)的特性，動物在不給藥的情況下依然有對此特定環(huán)境的偏愛,。

 （2）動物：常用雄性大鼠或小鼠,。

 （3）實驗步驟：

 試驗裝置為黑、白兩個互通的盒子,，中間有可活動的隔板隔開,。動物每天上午、下午（或隔天）分別給受試物和生理鹽水各一次,，給生理鹽水后將動物放入一側(cè)盒子,，給藥后動物放入另一側(cè)盒子，每次在盒中停留30-40min,，連續(xù)訓(xùn)練5天,。第6天在固定時間不給藥的情況下將動物放在黑、白盒之間的活動臺上,，同時用隔板將黑,、白盒半隔開。以動物爬到盒底的瞬間開始計時,，記錄15min內(nèi)動物分別在兩盒內(nèi)停留的時間,。

 （4）結(jié)果評價：

 如果動物在一側(cè)盒子內(nèi)停留時間顯著延長，則表明其對伴藥盒產(chǎn)生位置偏愛,，該受試物具有偏愛效應(yīng),。以嗎啡為陽性對照藥，比較它們在等效ED50倍數(shù)劑量條件下的偏愛效應(yīng),，或比較產(chǎn)生相似位置偏愛效應(yīng)的藥物劑量,，即可反映該受試物的精神依賴性潛力的強(qiáng)度。

 本試驗的準(zhǔn)確性取決于訓(xùn)練次數(shù)和每天訓(xùn)練的時間,。訓(xùn)練次數(shù)越多,，條件聯(lián)系越牢固；時間過短則條件聯(lián)系不牢固,，時間過長則離散度增大,。