• 【發(fā)布單位】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【發(fā)布文號(hào)】國(guó)食藥監(jiān)注[2007]643號(hào)
• 【發(fā)布日期】2007-10-23
• 【生效日期】2007-10-23
• 【失效日期】--
• 【文件來(lái)源】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【所屬類(lèi)別】政策參考

藥物非臨床依賴(lài)性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

藥物非臨床依賴(lài)性研究技術(shù)指導(dǎo)原則
 
(國(guó)食藥監(jiān)注[2007]643號(hào))





各省,、自治區(qū),、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：



 為科學(xué)規(guī)范和指導(dǎo)藥物研究工作，國(guó)家局組織制定了《吸入制劑質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《化學(xué)藥物口服緩釋制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥物非臨床依賴(lài)性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》5個(gè)藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則,，現(xiàn)予發(fā)布,，請(qǐng)參照?qǐng)?zhí)行。



國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局

二○○七年十月二十三日





藥物非臨床依賴(lài)性研究技術(shù)指導(dǎo)原則



 一,、概述

 藥物依賴(lài)性是指藥物長(zhǎng)期與機(jī)體相互作用,，使機(jī)體在生理機(jī)能、生化過(guò)程和/或形態(tài)學(xué)發(fā)生特異性,、代償性和適應(yīng)性改變的特性,，停止用藥可導(dǎo)致機(jī)體的不適和/或心理上的渴求。依賴(lài)性可分為軀體依賴(lài)性和精神依賴(lài)性,。軀體依賴(lài)性主要是機(jī)體對(duì)長(zhǎng)期使用依賴(lài)性藥物所產(chǎn)生的一種適應(yīng)狀態(tài),，包括耐受性和停藥后的戒斷癥狀。精神依賴(lài)性是藥物對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用所產(chǎn)生的一種特殊的精神效應(yīng),，表現(xiàn)為對(duì)藥物的強(qiáng)烈渴求和強(qiáng)迫性覓藥行為,。依賴(lài)性?xún)A向可以在動(dòng)物或人體的藥物研究過(guò)程中反映出來(lái)。

 軀體依賴(lài)與精神依賴(lài)可能同時(shí)存在,，也可能有分離,，如興奮劑通常表現(xiàn)為精神依賴(lài),，軀體戒斷癥狀并不明顯。

 耐受性和敏感性（敏化）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)適應(yīng)性改變的兩種不同表現(xiàn)形式,。耐受性是指反復(fù)使用某種藥物以后,，機(jī)體對(duì)藥物的敏感性降低，需增大劑量才能產(chǎn)生原有的效應(yīng),。與耐受性相反,，敏化是指在反復(fù)使用藥物以后，機(jī)體對(duì)藥物的敏感性提高,，藥物的效應(yīng)增強(qiáng)。成癮藥物敏化現(xiàn)象表現(xiàn)為行為反應(yīng)和自主性覓藥動(dòng)機(jī)增強(qiáng),。

 目前已知可產(chǎn)生依賴(lài)性的化合物主要有阿片類(lèi),、可卡因、苯丙胺類(lèi),、大麻類(lèi),、苯二氮卓類(lèi)和巴比妥類(lèi)及某些甾體激素類(lèi)等。

 本指導(dǎo)原則的目的,，是為在藥物研發(fā)過(guò)程中進(jìn)行動(dòng)物潛在依賴(lài)性研究時(shí)提供技術(shù)指導(dǎo),。非臨床藥物依賴(lài)性研究可為臨床提供藥物依賴(lài)性?xún)A向的信息，獲得的非臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)有利于指導(dǎo)臨床研究和合理用藥,，警示濫用傾向,。

 本技術(shù)指導(dǎo)原則適用于中藥、天然藥物和化學(xué)藥等新藥的依賴(lài)性研究,。

 二,、基本原則

 （一）實(shí)驗(yàn)管理

 依賴(lài)性研究是藥物非臨床安全性研究的一部分，根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥品管理法》,，必須執(zhí)行“藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范”,。

 （二）具體問(wèn)題具體分析

 中藥、天然藥物和化學(xué)藥等的情況復(fù)雜,，本文所提及的內(nèi)容不可能涵蓋所有中藥,、天然藥物和化學(xué)藥依賴(lài)性試驗(yàn)的全部?jī)?nèi)容，依賴(lài)性研究應(yīng)遵循“具體問(wèn)題具體分析”的原則,。

 （三）整體性

 藥物的研發(fā)是一個(gè)連續(xù)的,、漸進(jìn)的系統(tǒng)工程，依賴(lài)性試驗(yàn)是藥物開(kāi)發(fā)的一個(gè)有機(jī)組成部分,。依賴(lài)性研究應(yīng)結(jié)合該受試物的藥學(xué),、藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué),、一般藥理學(xué)及毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果綜合分析與評(píng)價(jià),。

 （四）試驗(yàn)設(shè)計(jì)

 試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合隨機(jī),、對(duì)照、盲法和可重復(fù)性的原則,。

 三,、基本內(nèi)容

 （一）適用范圍

 1、與已知具有潛在依賴(lài)性化合物結(jié)構(gòu)相似的新的化合物,；

 2,、作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛,、鎮(zhèn)靜,、催眠及興奮作用的藥物；

 3,、復(fù)方中含有已知較強(qiáng)依賴(lài)性成分的藥物,；

 4、直接或間接作用于中樞阿片受體,、大麻受體,、多巴胺受體、去甲腎上腺素受體,、5-羥色胺受體,、N-膽堿受體、γ-氨基丁酸受體,、苯二氮卓受體等受體的藥物,；

 5、已知代謝物中有依賴(lài)性成份,；

 6,、擬用于戒毒的藥物；

 7,、原認(rèn)為不具依賴(lài)性,，而在臨床研究或臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)有依賴(lài)性?xún)A向的藥物。

 （二）受試物

 1,、中藥,、天然藥物

 依賴(lài)性試驗(yàn)擬用受試物應(yīng)能充分代表擬臨床試驗(yàn)受試物或擬上市藥品，因此該受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定,、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品,，并附有研制單位的自檢報(bào)告。一般采用中試樣品,，并注明受試物的名稱(chēng),、來(lái)源、批號(hào),、含量（或規(guī)格）,、保存條件及配制方法等,。如不采用中試樣品，應(yīng)有充分的理由,。如果由于給藥容量或給藥方法限制,，可采用原料藥進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明批號(hào),、規(guī)格及生產(chǎn)廠家,。

 2、化學(xué)藥物

 依賴(lài)性試驗(yàn)的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定,、符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品,，并注明受試物的名稱(chēng)、來(lái)源,、批號(hào),、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等,，并附有研制單位的自檢報(bào)告。所用輔料,、溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號(hào),、規(guī)格和生產(chǎn)廠家，并符合試驗(yàn)要求,。

 （三）試驗(yàn)系統(tǒng)

 1,、選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的依據(jù)

 為了獲得科學(xué)有效的依賴(lài)性信息，應(yīng)選擇最適合的動(dòng)物模型或其他試驗(yàn)系統(tǒng),。選擇試驗(yàn)系統(tǒng)的因素包括試驗(yàn)系統(tǒng)的藥效學(xué)反應(yīng),，如敏感性、特異性和重現(xiàn)性,；受試物的背景資料,，如藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)等特點(diǎn),；試驗(yàn)動(dòng)物的種屬,、品系、性別和年齡等,。如果選擇特殊的試驗(yàn)系統(tǒng),，應(yīng)說(shuō)明原因。

 2,、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物包括小鼠,、大鼠、猴等,，一般情況下選用雄性動(dòng)物,，必要時(shí)增加雌性動(dòng)物,。通常選用大、小鼠,，對(duì)于高度懷疑具有致依賴(lài)性潛能的藥物,，而嚙齒類(lèi)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果為陰性，則應(yīng)選擇靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物,。動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定的等級(jí)要求,。

 3、離體試驗(yàn)系統(tǒng)

 離體試驗(yàn)系統(tǒng)可用于支持性研究（如研究藥物的活性特點(diǎn)和作用機(jī)理）,。常用離體試驗(yàn)系統(tǒng)主要包括：離體器官,、組織、細(xì)胞,、亞細(xì)胞器,、受體、離子通道和酶等,。

 （四）給藥劑量

 依賴(lài)性研究應(yīng)在一個(gè)較寬的劑量范圍內(nèi)進(jìn)行,，可根據(jù)不同的試驗(yàn)方法和目的選擇不同的給藥劑量。一般采用主要藥效ED50的倍數(shù)遞增或最小有效劑量的倍數(shù)遞增,，同時(shí)結(jié)合藥物的溶解性,、毒性及對(duì)運(yùn)動(dòng)功能、學(xué)習(xí)能力和記憶能力的影響來(lái)設(shè)計(jì)劑量,。每個(gè)試驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組,。

 （五）給藥途徑

 原則上給藥途徑應(yīng)和臨床一致，盡可能增加靜脈給藥途徑,。由于模型的選擇或者考慮到以后可能的非臨床濫用的不同給藥途徑,，也可考慮增加其他給藥途徑。

 （六）對(duì)照組

 應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和溶媒對(duì)照組,，如受試物需采用特殊的溶媒溶解,，還應(yīng)增設(shè)空白對(duì)照。如果受試物為較純的單一化合物,，與其母核結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物具有明顯的依賴(lài)性,，則還應(yīng)選擇此化合物為陽(yáng)性對(duì)照藥。

 （七）試驗(yàn)要求

 藥物依賴(lài)性研究一般包括神經(jīng)藥理學(xué)試驗(yàn),、軀體依賴(lài)性試驗(yàn)和精神依賴(lài)性試驗(yàn)三部分內(nèi)容,。

 1、神經(jīng)藥理學(xué)試驗(yàn)

 如有早期的體外依賴(lài)性試驗(yàn),，所獲陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果還應(yīng)通過(guò)體內(nèi)研究來(lái)進(jìn)一步確認(rèn)（除1.1的情況外）,。可利用神經(jīng)藥理學(xué)方法,，對(duì)行為學(xué)效應(yīng)和神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,，初步判斷受試物有無(wú)依賴(lài)性?xún)A向,，這些內(nèi)容可通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)、一般藥理學(xué)試驗(yàn)或毒理學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行觀察,，具體方法不再列出,。

 1.1 一般情況下，充分揭示藥物的藥理特性之后,，還需要進(jìn)行進(jìn)一步潛在軀體依賴(lài)性和精神依賴(lài)性的研究。同時(shí)出現(xiàn)下述三種情況除外：

 （1）在有效濃度范圍內(nèi),，藥物與依賴(lài)性相關(guān)的分子靶點(diǎn)無(wú)相互作用,，或者雖然觀察到藥物與相關(guān)靶點(diǎn)的結(jié)合，但這種結(jié)合不會(huì)引起相應(yīng)的功能變化,。

 （2）體內(nèi)研究結(jié)果未顯示出潛在依賴(lài)性,。

 （3）未發(fā)現(xiàn)此藥物具有可能與依賴(lài)有關(guān)的新的作用機(jī)制。

 1.2 當(dāng)潛在依賴(lài)性的類(lèi)別和程度已經(jīng)從體外試驗(yàn)中充分暴露出來(lái)（例如一個(gè)完全μ受體激動(dòng)劑）,，就不需再進(jìn)行進(jìn)一步的研究,。

 1.3 如果發(fā)現(xiàn)此藥物有可能與依賴(lài)有關(guān)的新的作用機(jī)制，則需要作進(jìn)一步的研究,。

 2,、軀體依賴(lài)性試驗(yàn)

 各種有依賴(lài)潛力的藥物產(chǎn)生軀體依賴(lài)癥狀不同，沒(méi)有理想的反映軀體依賴(lài)性的單一指標(biāo),，所以需要多種指標(biāo)來(lái)綜合評(píng)價(jià)。生理指標(biāo)可采用體重,、體溫,、呼吸、攝食量等,；在行為學(xué)試驗(yàn)中,，可采用反映運(yùn)動(dòng)功能、學(xué)習(xí)能力,、記憶能力和動(dòng)機(jī)行為改變的指標(biāo),。指標(biāo)選擇的標(biāo)準(zhǔn)為：適宜在給藥前,、給藥期間和給藥后進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,，從而有利于描述機(jī)體產(chǎn)生的耐受及敏化的程度、特征及發(fā)展過(guò)程,。

 2.1 方法

 評(píng)價(jià)藥物軀體依賴(lài)性的一般試驗(yàn)方法有三種：自然戒斷試驗(yàn)、催促戒斷試驗(yàn),、替代試驗(yàn),。無(wú)論是自然戒斷還是催促戒斷，動(dòng)物都會(huì)出現(xiàn)一系列程度不同的表現(xiàn),，但不是所有戒斷癥狀在一個(gè)受試動(dòng)物身上都能出現(xiàn),。由于每種方法觀察的指標(biāo)都不相同,，可結(jié)合藥效學(xué),、一般藥理學(xué)表現(xiàn)選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。結(jié)合我國(guó)的具體情況,，可以采用：

 小鼠自然戒斷試驗(yàn)

 小鼠催促戒斷試驗(yàn)

 大鼠自然戒斷試驗(yàn)

 大鼠催促戒斷試驗(yàn)

 大鼠替代試驗(yàn)

 小鼠替代試驗(yàn)

 猴自然戒斷試驗(yàn)

 猴催促戒斷試驗(yàn)

 也可采用其他的方法,，但需加以說(shuō)明,。

 2.2 戒斷反應(yīng)觀察主要注意事項(xiàng)

 a.給藥劑量、頻率和周期應(yīng)該使動(dòng)物產(chǎn)生神經(jīng)適應(yīng)性反應(yīng),。

 b.戒斷反應(yīng)的觀察應(yīng)該有足夠時(shí)間和頻度,，并且注意給藥前后的自身比較。

 c．自然戒斷和催促戒斷兩種方式都需進(jìn)行,，但可在不同動(dòng)物模型上進(jìn)行,。

 d.盡可能采用儀器檢測(cè)的客觀指標(biāo)。

 e.有依賴(lài)性的藥物在戒斷后往往表現(xiàn)出反跳現(xiàn)象（急性藥理學(xué)作用相反的癥狀）,，在選擇觀察指標(biāo)時(shí)加以注意,。

 3、精神依賴(lài)性試驗(yàn)

 具有精神依賴(lài)性的藥物能促使用藥者周期性或連續(xù)性地出現(xiàn)感受欣快效應(yīng)的用藥渴求,，但這是一種主觀體驗(yàn),，只能間接用藥物所導(dǎo)致的動(dòng)物行為改變來(lái)反映。常選用的方法有：自身給藥試驗(yàn),、藥物辨別試驗(yàn),、條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)、行為敏化試驗(yàn),。

 3.1 方法

 猴自身給藥試驗(yàn)

 大鼠自身給藥試驗(yàn)

 大鼠條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)

 小鼠條件性位置偏愛(ài)試驗(yàn)

 大鼠藥物辨別試驗(yàn)

 小鼠行為敏化試驗(yàn)

 大鼠行為敏化試驗(yàn)

 也可采用其他的方法，但需加以說(shuō)明。

 3.2 精神依賴(lài)性研究主要注意事項(xiàng)：

 c.在自身給藥試驗(yàn)中需要注意藥物毒副作用相關(guān)的無(wú)應(yīng)答期（動(dòng)物表現(xiàn)出覓藥行為之前的一段時(shí)間）、增加劑量的時(shí)間點(diǎn)和替代的程序,。

 d.自身給藥試驗(yàn)中，盡可能結(jié)合軀體依賴(lài)性試驗(yàn)結(jié)果,，設(shè)計(jì)合適的劑量，并至少變換三次劑量。

 e.在條件性位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)使用平衡的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),，避免動(dòng)物天然傾向性影響,。

 4、體外依賴(lài)性試驗(yàn)

 （八）依賴(lài)性研究項(xiàng)目的選擇

 為了獲得足夠的藥物依賴(lài)性信息,，藥物依賴(lài)性研究?jī)?nèi)容的選擇需要參考藥效學(xué),、一般藥理學(xué)及其他毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果，同時(shí)至少應(yīng)進(jìn)行軀體依賴(lài)性試驗(yàn)（自然戒斷和催促戒斷）和一項(xiàng)精神依賴(lài)性試驗(yàn),。有強(qiáng)烈精神活性并擬用于改變精神神經(jīng)活動(dòng)的藥物,，應(yīng)有靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

 （九）依賴(lài)性研究的階段性

 1,、對(duì)于可能存在依賴(lài)性的單一化合物：

 體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究應(yīng)該在Ⅰ期臨床試驗(yàn)前完成,。在早期非臨床或臨床研究中觀察到的安全性信息可以為進(jìn)一步非臨床依賴(lài)性研究提供參考。更進(jìn)一步的軀體依賴(lài)性和精神依賴(lài)性試驗(yàn)觀察應(yīng)在Ⅱ期臨床試驗(yàn)開(kāi)始前完成,。必要時(shí)需進(jìn)行體外試驗(yàn)和依賴(lài)性的機(jī)理探討,。

 2、對(duì)于中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑：

 中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑成份復(fù)雜,，作用靶點(diǎn)多,，體外試驗(yàn)結(jié)果參考意義有限。體內(nèi)神經(jīng)藥理學(xué)研究結(jié)果對(duì)于判斷是否具有依賴(lài)性有一定的意義,，但其結(jié)果的評(píng)價(jià)往往有較大的難度和局限,。體內(nèi)依賴(lài)性試驗(yàn)應(yīng)作為中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑依賴(lài)性考察的主要方法。

 對(duì)于需進(jìn)行藥物依賴(lài)性研究的中藥有效部位或中藥復(fù)方制劑,，應(yīng)在Ⅱ期臨床開(kāi)始前提供全面的體內(nèi)依賴(lài)性試驗(yàn)的相關(guān)數(shù)據(jù),。

 （十）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

 在對(duì)所得到的非臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析與評(píng)價(jià)時(shí)，一般應(yīng)從以下幾方面進(jìn)行考慮：

 1,、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異與生物學(xué)差異的問(wèn)題,。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異可判斷受試物對(duì)考察的試驗(yàn)結(jié)果是否存在影響，但由于樣本數(shù)的限制,，有時(shí)可能掩蓋真正的生物學(xué)差異，故樣本數(shù)應(yīng)足夠充分,，同時(shí),，還應(yīng)注意對(duì)每個(gè)樣本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。對(duì)于統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異,，還應(yīng)結(jié)合動(dòng)物的正常反應(yīng)加以分析,。

 2、陽(yáng)性藥的選擇,。盡可能選擇結(jié)構(gòu)相似和/或作用機(jī)理相似的合適陽(yáng)性藥,。

 3、對(duì)動(dòng)物異常行為出現(xiàn)的時(shí)間,、持續(xù)時(shí)間及作用強(qiáng)度的觀察,。

 4,、所選擇的動(dòng)物是否合適，模型是否可靠,。

 5,、分析所選擇指標(biāo)的靈敏性、特異性和可靠性,。

 6,、對(duì)具體試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估及整體評(píng)估。

 7,、比較產(chǎn)生依賴(lài)性的劑量與有效劑量,、中毒劑量的關(guān)系。

 8,、分析是否存在耐受性,，及耐受與依賴(lài)的關(guān)系。

 9,、根據(jù)藥物擬定的適應(yīng)癥,、有效性，綜合分析繼續(xù)進(jìn)行臨床研究的可行性,。

 總之,，在對(duì)藥物潛在依賴(lài)性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中，應(yīng)充分利用所有的非臨床研究數(shù)據(jù),，并結(jié)合藥學(xué),、藥理學(xué)和臨床研究信息，進(jìn)行科學(xué)客觀的分析和綜合評(píng)價(jià),，以判斷是否具有潛在依賴(lài)性,。

 四、參考文獻(xiàn)

 藥物依賴(lài)性試驗(yàn),，新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué),、藥理學(xué)、毒理學(xué)）,。中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局,，1993:219-221

 藥物依賴(lài)性試驗(yàn)，徐叔云主編,，藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué),，第三版，人民衛(wèi)生出版社,。北京,，2002：251-258

 Guideline on the Non-Clinical Investigation of Dependence Potential of Medicinal Products. EMEA, 2006

 五、附錄

 （一）軀體依賴(lài)性試驗(yàn)

 1、小鼠跳躍試驗(yàn)（催促戒斷試驗(yàn)）

 （1）原理：短期內(nèi)重復(fù)大劑量給藥,，然后注射阿片受體拮抗劑,，如受試物屬于阿片類(lèi)藥物，則動(dòng)物發(fā)生跳躍反應(yīng),，跳躍次數(shù)可反應(yīng)依賴(lài)性程度,。

 （2）動(dòng)物：健康小鼠。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：藥物劑量常按遞增法,，有時(shí)也配合采用恒量法，給藥總量可按鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計(jì)算,。連續(xù)給藥數(shù)天（根據(jù)藥物鎮(zhèn)痛作用的強(qiáng)弱確定給藥時(shí)間），末次藥后2h（以嗎啡為例）腹腔注射納絡(luò)酮,，觀察30min內(nèi)的跳躍動(dòng)物數(shù)及跳躍次數(shù),，還可觀察1h內(nèi)的小鼠體重減輕程度。

 2,、大鼠體重減輕試驗(yàn)（自然或催促戒斷試驗(yàn)）

 （1）原理：阿片類(lèi)藥物的戒斷癥狀出現(xiàn)后，大鼠體重減輕,，但非阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥和鎮(zhèn)靜催眠藥則無(wú)明顯作用,。阿片類(lèi)戒斷后大鼠體重急劇下降，以戒斷后24-48h最明顯,，是考察阿片類(lèi)身體依賴(lài)性的較好指標(biāo),。

 （2）動(dòng)物：健康大鼠。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：自然戒斷試驗(yàn)每天早,、晚相同時(shí)間測(cè)定大鼠體重,，每次測(cè)重后按體重給藥，每天2-3次,，連續(xù)給藥數(shù)周（不少于4周）,。劑量根據(jù)LD50和ED50及給藥途徑制定。原則上低劑量應(yīng)高于藥效學(xué)有效劑量,，高劑量應(yīng)盡可能高,，但不能出現(xiàn)毒性反應(yīng)。末次給藥后每天測(cè)量體重2-3次（與給藥次數(shù)相同）,，計(jì)算平均值,，比較停藥前后不同時(shí)間的體重變化。催促戒斷試驗(yàn)以劑量遞增法給藥,，連續(xù)給藥1周,，末次給藥后2h注射拮抗劑，在2h內(nèi)每隔30min測(cè)量體重1次,，比較體重下降百分率,。也可同時(shí)觀察大鼠給藥后行為變化和體溫及自發(fā)活動(dòng)的變化情況，并以第1次給藥至反復(fù)給藥1周內(nèi)為重要,。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：如戒斷后大鼠體重急劇下降,，則反應(yīng)受試物具有身體依賴(lài)性。

 3,、大鼠替代試驗(yàn)（替代試驗(yàn),、交叉軀體依賴(lài)性試驗(yàn)）

 （1）原理：阿片類(lèi)藥物都有基本相同的藥理作用，給動(dòng)物阿片類(lèi)藥物并使之產(chǎn)生身體依賴(lài)性后停藥,，代之以受試物,，觀察動(dòng)物是否發(fā)生戒斷癥狀。

 （2）動(dòng)物：健康大鼠,。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：摻食法連續(xù)給以嗎啡使動(dòng)物產(chǎn)生身體依賴(lài)性,，5天后以生理鹽水、嗎啡或不同劑量受試物代替,，每8h給藥1次,，連續(xù)6次。替代前（基礎(chǔ)值）及替代后每隔4h測(cè)定體重1次,，計(jì)算各組大鼠的體重變化,，比較替代藥物組和嗎啡依賴(lài)組之間的差異,。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：按等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)計(jì)，比較達(dá)到同樣替代程度的受試藥的劑量和嗎啡的劑量,，可以確定受試藥物的身體依賴(lài)性潛力的強(qiáng)弱程度,。對(duì)體內(nèi)代謝迅速、皮下給藥不易形成依賴(lài)性的藥物,，用摻食法誘發(fā)依賴(lài)性可以獲得較明確的結(jié)果,。

 4、大鼠攻擊試驗(yàn)（自然或催促戒斷試驗(yàn)）

 （1）原理：大鼠對(duì)阿片類(lèi)藥物形成依賴(lài)性后停藥或用拮抗劑催促,，可發(fā)生戒斷癥狀,，易與同籠大鼠發(fā)生相互攻擊（一般停藥后72h最明顯，24h時(shí)極不明顯,；具有間斷性的特點(diǎn),，可連續(xù)幾小時(shí)甚至幾天）。

 （2）動(dòng)物：健康大鼠,。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：按遞增劑量給藥,，連續(xù)數(shù)天，如有依賴(lài)性,，則停藥后大鼠出現(xiàn)體重減輕,、搖體、眼瞼下垂及扭體等戒斷癥狀,；此時(shí)如將大鼠同居一籠,，則出現(xiàn)嘶叫、對(duì)陣和相互攻擊現(xiàn)象,，甚至受傷致死,。一般于停藥后第3天進(jìn)行試驗(yàn)（將動(dòng)物同居一籠），觀察1h,，記錄對(duì)陣時(shí)程和嘶叫,，以及攻擊和互咬次數(shù),。

 (4)結(jié)果評(píng)價(jià)：本試驗(yàn)可反應(yīng)嗎啡成癮后腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)的功能。停藥后戒斷癥狀是多巴胺功能亢進(jìn)的表現(xiàn),，多巴胺受體激動(dòng)劑可增強(qiáng)攻擊反應(yīng),。所以注意排除藥物對(duì)多巴胺功能的干擾所產(chǎn)生的假陽(yáng)性或假陰性,。

 5,、戒斷癥狀的記分評(píng)定（自然或催促戒斷試驗(yàn)）

 （1）原理：動(dòng)物長(zhǎng)期獲得阿片類(lèi)藥物后，其中樞神經(jīng)系統(tǒng)能產(chǎn)生一種適應(yīng)狀態(tài),，停藥或注射拮抗劑后機(jī)體出現(xiàn)一系列生理干擾現(xiàn)象即戒斷癥狀。對(duì)這些戒斷癥狀的輕重程度進(jìn)行綜合評(píng)分即可判斷藥物的身體依賴(lài)性潛力,。

 （2）動(dòng)物：常用大鼠和猴。其中阿片類(lèi)藥物在猴上的依賴(lài)性表現(xiàn)與人較接近,，戒斷癥狀比較明顯且易于觀察,。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：按劑量遞增法并配合恒量法給藥，也可用拮抗劑納絡(luò)酮催促戒斷,。自然戒斷或催促戒斷后觀察一系列戒斷癥狀,，根據(jù)戒斷癥狀的嚴(yán)重程度和持續(xù)時(shí)間進(jìn)行綜合評(píng)分,。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：

 戒斷癥狀的綜合評(píng)分目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),，可對(duì)戒斷癥狀進(jìn)行全面綜合評(píng)分，也可對(duì)其中主要戒斷癥狀進(jìn)行綜合評(píng)分,。猴戒斷癥狀可分為輕,、中、重,、極重4個(gè)等級(jí),，每一等級(jí)的評(píng)分可根據(jù)癥狀種類(lèi)的多少和出現(xiàn)的頻率定分,，但不能大于級(jí)差分值。

 依賴(lài)性潛力的大小可依據(jù)等效依賴(lài)性劑量來(lái)判斷,，即產(chǎn)生近似依賴(lài)狀態(tài)的劑量來(lái)判定，也可按相同的等效鎮(zhèn)痛ED50的倍數(shù)劑量來(lái)比較,。

 本方法同時(shí)也可進(jìn)行替代試驗(yàn)?？稍谧匀换虼叽俳鋽嘣囼?yàn)中觀察。

 附錄（二）精神依賴(lài)性試驗(yàn)

 1,、自身給藥試驗(yàn)

 （1）原理：藥物的精神依賴(lài)性可產(chǎn)生對(duì)該藥的渴求，對(duì)覓藥行為和用藥行為具有強(qiáng)化效應(yīng),。本試驗(yàn)?zāi)M人的行為，通過(guò)壓桿方式來(lái)獲得藥物,，反映藥物的強(qiáng)化效應(yīng),，可信度較高且可進(jìn)行定量比較。

 （2）動(dòng)物：常用大鼠和猴,。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：

 動(dòng)物麻醉后無(wú)菌條件下行靜脈插管并用馬甲背心固定,，連接彈簧保護(hù)套及轉(zhuǎn)軸，彈簧套內(nèi)硅膠管與插管相連,，轉(zhuǎn)軸使動(dòng)物在籠內(nèi)能自由活動(dòng),，轉(zhuǎn)軸另一端與恒速注射泵及儲(chǔ)藥系統(tǒng)相連。術(shù)后常規(guī)抗感染,，恢復(fù)4-7天后進(jìn)行踏板訓(xùn)練,，使動(dòng)物形成穩(wěn)定的自身給藥行為。試驗(yàn)過(guò)程中注意保持套管暢通,。如藥物具有強(qiáng)化效應(yīng),，動(dòng)物經(jīng)過(guò)短期訓(xùn)練后產(chǎn)生穩(wěn)定的自身給藥行為，能自動(dòng)踩壓踏板接通注藥裝置將藥物注入體內(nèi),。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：

 通過(guò)觀察是否形成自身給藥行為來(lái)判斷藥物是否具有強(qiáng)化效應(yīng),；由于動(dòng)物個(gè)體差異較大，建議將每只動(dòng)物自身給藥前后踏板次數(shù)變化的百分率進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì),。

 本試驗(yàn)中也可同時(shí)進(jìn)行替代試驗(yàn),。

 通過(guò)更換受試物的劑量，比較它們?cè)诘刃D50倍數(shù)劑量條件下的踏板次數(shù)或比較產(chǎn)生類(lèi)似踏板模式的藥物劑量,，即可反映受試物的精神依賴(lài)性的強(qiáng)度,。

 本試驗(yàn)設(shè)計(jì)適用于靜脈給藥，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意藥物穩(wěn)定性和配藥時(shí)間的關(guān)系,。如受試藥為口服給藥,，則不需進(jìn)行手術(shù),，而僅將每次踏板的反應(yīng)變?yōu)榻o一次口服制劑即可。

 2,、大鼠藥物辨別試驗(yàn)

 （1）原理：依賴(lài)性藥物使人產(chǎn)生的情緒效應(yīng)如欣快,、滿(mǎn)足感等，屬于主觀性效應(yīng),。具有主觀性效應(yīng)的藥物可以控制動(dòng)物的行為反應(yīng),，使之產(chǎn)生辨別行為效應(yīng)。本試驗(yàn)可準(zhǔn)確判斷受試物是否屬于阿片類(lèi)藥物,，以及產(chǎn)生精神依賴(lài)性潛力大小,。

 （2）動(dòng)物：常用大鼠。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：

 利用辨別試驗(yàn)箱和訓(xùn)練程序訓(xùn)練動(dòng)物正確壓桿,，然后通過(guò)辨別訓(xùn)練訓(xùn)練動(dòng)物產(chǎn)生穩(wěn)定準(zhǔn)確地辨別嗎啡和生理鹽水的能力,。最后進(jìn)行替代試驗(yàn)，以不同劑量嗎啡和受試物進(jìn)行替代,，觀察壓桿正確率與劑量之間的關(guān)系,，做出劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)，求得藥物辨別刺激的半數(shù)有效劑量（ED50,，值越小精神依賴(lài)性潛力越大）,。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：

 藥物辨別刺激ED50值越小反映精神依賴(lài)性潛力越大；如替代藥物不產(chǎn)生訓(xùn)練藥物反應(yīng),，則說(shuō)明該藥不屬于嗎啡類(lèi)藥物,。本試驗(yàn)不適用于阿片類(lèi)拮抗劑。由于藥物辨別刺激并非完全基于藥物濫用產(chǎn)生,，因此在評(píng)價(jià)藥物精神依賴(lài)性潛力方面不如自身給藥試驗(yàn)可信,，但在藥物主觀效應(yīng)強(qiáng)度的定量比較方面有其優(yōu)越性。由于動(dòng)物訓(xùn)練周期較長(zhǎng)（一般3-4個(gè)月）,，試驗(yàn)中要注意耐受性的產(chǎn)生,。

 3、條件位置偏愛(ài)試驗(yàn)

 （1）原理：根據(jù)巴甫洛夫的條件反射學(xué)說(shuō),，如果把獎(jiǎng)賞刺激與某個(gè)特定的非獎(jiǎng)賞性條件刺激如某特定環(huán)境反復(fù)練習(xí)之后,，后者便可獲得獎(jiǎng)賞特性。反復(fù)幾次將動(dòng)物給藥后放在一個(gè)特定的環(huán)境中,，如藥物具有獎(jiǎng)賞效應(yīng),，則特定環(huán)境就會(huì)具有了獎(jiǎng)賞效應(yīng)的特性，動(dòng)物在不給藥的情況下依然有對(duì)此特定環(huán)境的偏愛(ài),。

 （2）動(dòng)物：常用雄性大鼠或小鼠,。

 （3）實(shí)驗(yàn)步驟：

 試驗(yàn)裝置為黑、白兩個(gè)互通的盒子，中間有可活動(dòng)的隔板隔開(kāi),。動(dòng)物每天上午,、下午（或隔天）分別給受試物和生理鹽水各一次，給生理鹽水后將動(dòng)物放入一側(cè)盒子,，給藥后動(dòng)物放入另一側(cè)盒子,，每次在盒中停留30-40min，連續(xù)訓(xùn)練5天,。第6天在固定時(shí)間不給藥的情況下將動(dòng)物放在黑,、白盒之間的活動(dòng)臺(tái)上，同時(shí)用隔板將黑,、白盒半隔開(kāi),。以動(dòng)物爬到盒底的瞬間開(kāi)始計(jì)時(shí)，記錄15min內(nèi)動(dòng)物分別在兩盒內(nèi)停留的時(shí)間,。

 （4）結(jié)果評(píng)價(jià)：

 如果動(dòng)物在一側(cè)盒子內(nèi)停留時(shí)間顯著延長(zhǎng),，則表明其對(duì)伴藥盒產(chǎn)生位置偏愛(ài)，該受試物具有偏愛(ài)效應(yīng),。以嗎啡為陽(yáng)性對(duì)照藥，比較它們?cè)诘刃D50倍數(shù)劑量條件下的偏愛(ài)效應(yīng),，或比較產(chǎn)生相似位置偏愛(ài)效應(yīng)的藥物劑量,，即可反映該受試物的精神依賴(lài)性潛力的強(qiáng)度。

 本試驗(yàn)的準(zhǔn)確性取決于訓(xùn)練次數(shù)和每天訓(xùn)練的時(shí)間,。訓(xùn)練次數(shù)越多,，條件聯(lián)系越牢固；時(shí)間過(guò)短則條件聯(lián)系不牢固,，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則離散度增大,。