• 【發(fā)布單位】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【發(fā)布文號(hào)】國(guó)食藥監(jiān)注[2006]639號(hào)
• 【發(fā)布日期】2006-12-19
• 【生效日期】2006-12-19
• 【失效日期】--
• 【文件來源】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【所屬類別】政策參考

藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則

(國(guó)食藥監(jiān)注[2006]639號(hào))





各省,、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：



 為科學(xué)規(guī)范和指導(dǎo)藥物研究工作,，保證藥物研究質(zhì)量,，國(guó)家局組織制定了《抗HIV藥物非臨床藥效學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等4個(gè)研究技術(shù)指導(dǎo)原則,，現(xiàn)予發(fā)布,，請(qǐng)參照?qǐng)?zhí)行。



 附件：1．抗HIV藥物非臨床藥效學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則?

 2．手性藥物質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則?

 3．藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則?

 4．細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則





 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局

 二○○六年十二月十九日





藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則



 一,、概述



 生殖毒性研究（Reproductive toxicity study）是藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容,，它與急性毒性、長(zhǎng)期毒性,、遺傳毒性等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系,，是藥物進(jìn)入臨床研究及上市的重要環(huán)節(jié)。擬用于人體的藥物,，應(yīng)根據(jù)受試物擬用適應(yīng)癥和作用特點(diǎn)等因素考慮進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn),。



 在藥物開發(fā)的過程中，生殖毒性研究的目的是通過動(dòng)物試驗(yàn)反映受試物對(duì)哺乳動(dòng)物生殖功能和發(fā)育過程的影響,，預(yù)測(cè)其可能產(chǎn)生的對(duì)生殖細(xì)胞,、受孕、妊娠,、分娩,、哺乳等親代生殖機(jī)能的不良影響，以及對(duì)子代胚胎-胎兒發(fā)育,、出生后發(fā)育的不良影響,。生殖毒性研究在限定臨床研究受試者范圍、降低臨床研究受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險(xiǎn)方面發(fā)揮重要作用,。



 本指導(dǎo)原則適用于中藥,、天然藥物和化學(xué)藥物的生殖毒性研究。



 本指導(dǎo)原則重點(diǎn)闡述動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn)中動(dòng)物,、給藥劑量,、給藥方法、試驗(yàn)方案選擇的基本原則,，并介紹一些常用的試驗(yàn)方案；對(duì)所獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析及評(píng)價(jià)要求,；以及所涉及的科學(xué)原理與背景,。



 二、基本原則



 （一）實(shí)驗(yàn)管理



 藥物的生殖毒性試驗(yàn)屬于非臨床安全性評(píng)價(jià)研究,，根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥品管理法》的規(guī)定,，必須執(zhí)行《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》。



 （二）具體問題具體分析



 生殖毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì),，應(yīng)在對(duì)受試物認(rèn)知的基礎(chǔ)上,，遵循“具體問題具體分析”的原則,。應(yīng)根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、理化性質(zhì),、已有的藥理毒理研究信息,、適應(yīng)癥和適用人群特點(diǎn)、臨床用藥方案等選擇合理的試驗(yàn)方法,，設(shè)計(jì)適宜的試驗(yàn)方案,，并綜合上述信息對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行全面分析評(píng)價(jià)。



 （三）隨機(jī),、對(duì)照,、重復(fù)



 生殖毒性試驗(yàn)應(yīng)符合一般動(dòng)物試驗(yàn)的基本原則，即隨機(jī),、對(duì)照和重復(fù),。



 三、基本內(nèi)容



 （一）總體考慮



 1,、受試物



 1.1 中藥及天然藥物



 生殖毒性試驗(yàn)的受試物應(yīng)能充分代表臨床研究受試物或上市藥品,，因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床研究質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品,，一般用中試樣品,，并注明受試物的名稱、來源,、批號(hào),、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等,。如不采用中試樣品,，應(yīng)有充分的理由。如果由于給藥容量或給藥方法限制,，可采用原料藥進(jìn)行試驗(yàn),。試驗(yàn)中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明批號(hào)、規(guī)格及生產(chǎn)廠家,。



 1.2 化學(xué)藥物



 生殖毒性試驗(yàn)的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定,、符合臨床研究用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品，并注明受試物的名稱,、來源,、批號(hào)、含量（或規(guī)格）,、保存條件及配制方法等,，并附有研制單位的自檢報(bào)告。所用輔料,、溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號(hào),、規(guī)格和生產(chǎn)廠家,，并符合試驗(yàn)要求。



 2,、受試物藥代動(dòng)力學(xué)研究



 在開始生殖毒性試驗(yàn)前,，掌握一些受試物藥代動(dòng)力學(xué)方面的信息，對(duì)于是否應(yīng)進(jìn)行動(dòng)物種屬選擇,、試驗(yàn)設(shè)計(jì)與給藥方案的調(diào)整等有重要提示作用,。這些藥代動(dòng)力學(xué)信息可能來源于非妊娠或非哺乳期動(dòng)物。在進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)時(shí),，可能有必要進(jìn)一步研究妊娠或哺乳期動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)情況,。（注釋1）



 3、試驗(yàn)系統(tǒng)



 3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物



 應(yīng)采用哺乳動(dòng)物進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn),。在選擇動(dòng)物種屬和品系時(shí),，應(yīng)考慮動(dòng)物的背景資料、實(shí)用性,、與人的相關(guān)性等,。應(yīng)從受試物、采用的試驗(yàn)方案和闡明試驗(yàn)結(jié)果的角度考慮所選擇動(dòng)物種屬和品系的優(yōu)缺點(diǎn)（注釋2）,。



 通常應(yīng)采用與其他毒理學(xué)試驗(yàn)相同的動(dòng)物種屬和品系,，這樣與其他毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果具有可比性，并可能避免進(jìn)行過多的預(yù)試驗(yàn),。大鼠實(shí)用性好,、與其他試驗(yàn)結(jié)果的可比性高并已積累了大量的背景資料，因此可作為生殖毒性試驗(yàn)首選的嚙齒類動(dòng)物,。



 在胚胎-胎仔發(fā)育毒性研究中,，一般還需要采用第二種哺乳動(dòng)物，其中家兔已積累了豐富的背景資料,，且容易獲得和實(shí)用,，因此家兔為優(yōu)先選用的非嚙齒類動(dòng)物。家兔不適合時(shí),，可根據(jù)具體情況,，選擇另一種可替代的非嚙齒類動(dòng)物或第二種嚙齒類動(dòng)物。



 通常選用年輕,、性成熟的成年動(dòng)物,，雌性動(dòng)物未經(jīng)產(chǎn)。個(gè)體動(dòng)物初始體重不應(yīng)超出平均體重±20%,。



 動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定的等級(jí)要求,，來源,、品系,、遺傳背景清楚,，并具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證。



 3.2 其他試驗(yàn)系統(tǒng)



 其他試驗(yàn)系統(tǒng)指哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物的細(xì)胞,、組織,、器官，體外或體內(nèi)培養(yǎng)體,。這些系統(tǒng)的試驗(yàn)結(jié)果有助于作用機(jī)理的分析,，但它們?nèi)狈Πl(fā)育過程的復(fù)雜性以及母體與生長(zhǎng)機(jī)體（胚胎）間動(dòng)態(tài)的相互變化。這些系統(tǒng)不能明確排除某一作用,，也不能對(duì)其危險(xiǎn)性/暴露情況進(jìn)行推測(cè),。這些試驗(yàn)系統(tǒng)尚不能替代目前生殖毒性試驗(yàn)常用的整體動(dòng)物（注釋3）。



 4,、給藥



 4.1 劑量選擇



 4.1.1 中藥及天然藥物



 可根據(jù)已有的研究資料（藥理,、急性毒性和長(zhǎng)期毒性、藥代動(dòng)力學(xué)研究）或預(yù)試驗(yàn)以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來進(jìn)行劑量設(shè)計(jì),。為觀察量效關(guān)系,，至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，必要時(shí)可增加劑量組,。高劑量應(yīng)出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng),，或?yàn)樽畲蠼o藥量/最大耐受量。低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的“未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平（NOAEL）”,。



 4.1.2 化學(xué)藥物



 可根據(jù)已有的研究資料（藥理,、急性毒性和長(zhǎng)期毒性、藥代動(dòng)力學(xué)研究）或預(yù)試驗(yàn)以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來選擇高劑量,，高劑量范圍內(nèi)應(yīng)該出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng),，在大多數(shù)情況下，1g/kg/天為最大給藥限量,。低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的NOAEL,。高劑量與低劑量間根據(jù)具體情況可設(shè)計(jì)1～2個(gè)劑量，以觀察可能的劑量反應(yīng)關(guān)系,。（注釋4）



 4.2 給藥途徑



 一般情況下,，給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑一致。如果擬用途徑有多種,，若研究提示不同給藥途徑的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)（包括分布）類似,，建議采用暴露量較高的給藥途徑。此外,，腹腔注射時(shí)可能會(huì)對(duì)子宮或胎仔產(chǎn)生直接作用,，故采用妊娠動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，一般不用該途徑,。（注釋5）



 4.3 給藥頻率



 通常每天給藥1次,。但應(yīng)參考藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),、預(yù)期臨床給藥情況增加或減少給藥次數(shù)。



 4.4對(duì)照組



 應(yīng)設(shè)賦形劑對(duì)照組,，其給藥途徑,、頻率應(yīng)與受試物組相同。當(dāng)賦形劑可能產(chǎn)生作用或影響受試物的作用時(shí),，應(yīng)另設(shè)空白對(duì)照組,。



 此外，根據(jù)具體情況考慮是否設(shè)陽性對(duì)照組,，如新的動(dòng)物系統(tǒng),、較長(zhǎng)時(shí)間未進(jìn)行過試驗(yàn)、新的試驗(yàn)設(shè)施等,。



 （二）試驗(yàn)方案



 1,、試驗(yàn)方案選擇的一般考慮



 在選擇試驗(yàn)方案時(shí)，應(yīng)借鑒受試物已有的或同類藥物的藥理,、毒理和藥代動(dòng)力學(xué)資料,，特別是在生殖毒性方面的信息。建議優(yōu)先考慮采用較為成熟的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案,。對(duì)大多數(shù)藥物而言,，三段試驗(yàn)方案（常用的試驗(yàn)方案）通常比較合適，能夠識(shí)別有可能發(fā)生損害的生殖發(fā)育階段,。但根據(jù)具體藥物情況的不同,，也可選擇其他能充分反映受試物生殖毒性的試驗(yàn)方案（注釋6），如單一試驗(yàn)設(shè)計(jì)或兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)等,。無論采用哪種試驗(yàn)方案,，各段試驗(yàn)之間（給藥處理）不應(yīng)留有間隔，并可對(duì)生殖過程的各階段進(jìn)行直接或間接評(píng)價(jià),。應(yīng)說明所選擇試驗(yàn)方案的合理性,。



 當(dāng)觀察到某一作用時(shí)，應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行進(jìn)一步的后續(xù)試驗(yàn),，以明確其毒性的性質(zhì),、范圍和原因等，包括判斷其劑量-反應(yīng)關(guān)系,，以有助于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,，并有助于區(qū)分給藥所致影響與偶發(fā)情況（注釋7）。



 聯(lián)合進(jìn)行多項(xiàng)生殖毒性試驗(yàn)時(shí),，應(yīng)注意在動(dòng)物成年期和從受孕到幼仔性成熟的發(fā)育各階段給藥,。為發(fā)現(xiàn)給藥所致的速發(fā)和遲發(fā)效應(yīng)，試驗(yàn)觀察應(yīng)持續(xù)一個(gè)完整的生命周期，即從某一代受孕到其下一代受孕間的時(shí)間周期,。為方便試驗(yàn),，可將一個(gè)完整生命周期過程分成以下幾個(gè)階段（注釋8）：



 A. 從交配前到受孕（成年雄性和雌性生殖功能、配子的發(fā)育和成熟,、交配行為、受精）,。



 B. 從受孕到著床（成年雌性生殖功能,、著床前發(fā)育、著床）,。



 C. 從著床到硬腭閉合（成年雌性生殖功能,、胚胎發(fā)育、主要器官形成）,。



 D. 從硬腭閉合到妊娠終止（成年雌性生殖功能,、胎仔發(fā)育和生長(zhǎng)、器官發(fā)育和生長(zhǎng)）,。



 E. 從出生到離乳（成年雌性生殖功能,、幼仔對(duì)宮外生活的適應(yīng)性、離乳前發(fā)育和生長(zhǎng)）,。



 F. 從離乳到性成熟（離乳后發(fā)育和生長(zhǎng),、獨(dú)立生活的適應(yīng)能力、達(dá)到性成熟的情況）,。



 2,、常用的試驗(yàn)方案



 常用的試驗(yàn)方案相當(dāng)于對(duì)下述各階段影響的聯(lián)合研究：生育力和早期胚胎發(fā)育、胚胎-胎仔發(fā)育,、圍產(chǎn)期發(fā)育（包括母體功能）,。



 2.1生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)（I段）



 2.1.1試驗(yàn)?zāi)康?


 包括上述生命周期的A階段和B階段，對(duì)雌雄動(dòng)物由交配前到交配期直至胚胎著床給藥,，以評(píng)價(jià)受試物對(duì)動(dòng)物生殖的毒性或干擾作用,。評(píng)價(jià)內(nèi)容包括配子成熟度、交配行為,、生育力,、胚胎著床前階段和著床等。對(duì)于雌性動(dòng)物,，應(yīng)對(duì)動(dòng)情周期,、受精卵輸卵管轉(zhuǎn)運(yùn)（tubal transport）、著床及胚胎著床前發(fā)育的影響進(jìn)行檢查,。對(duì)于雄性動(dòng)物,，應(yīng)觀察生殖器官組織學(xué)檢查方法可能檢測(cè)不出的功能性影響(如性欲、附睪精子成熟度等)。



 2.1.2動(dòng)物選擇



 至少采用一種動(dòng)物,，推薦用大鼠,。動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要，通常大鼠不少于20只/性別/組（注釋9）,。



 2.1.3 給藥期



 一般情況下,，交配前給藥期可定為雄性動(dòng)物4～10周，雌性動(dòng)物2周,；雄性動(dòng)物給藥期應(yīng)持續(xù)整個(gè)交配期直至被處死,，雌性動(dòng)物至少應(yīng)持續(xù)至胚胎著床（妊娠第6～7天）。應(yīng)對(duì)交配前給藥期長(zhǎng)短的選擇進(jìn)行說明并提供依據(jù)（注釋10）,。



 2.1.4 動(dòng)物處理



 建議雌雄動(dòng)物按1:1交配,。一般情況下，雌性動(dòng)物在妊娠第13～15天處死,，雄性動(dòng)物在交配成功后處死（注釋11）,。



 2.1.5 觀察指標(biāo)



 試驗(yàn)期間：



 - 體征和死亡情況，至少1次/天



 - 體重和體重變化,，至少2次/周(注釋12)



 - 攝食量,，至少1次/周(交配期除外)



 - 交配期間至少每日進(jìn)行陰道涂片檢查，以檢查是否對(duì)交配或交配前時(shí)間有影響



 - 其他毒性研究中已證明有意義的指標(biāo)



 終末檢查：



 - 剖檢所有親代動(dòng)物



 - 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官,，必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查,，同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物的相應(yīng)器官以便比較



 - 保存所有動(dòng)物的睪丸、附睪或卵巢,、子宮，必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查,，根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)價(jià)



 - 建議計(jì)數(shù)附睪中的精子數(shù)并進(jìn)行精子活力檢查



 - 計(jì)數(shù)黃體數(shù),，活胎、死胎,、吸收胎并計(jì)算著床數(shù)(注釋12)



 2.2胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)（II段）



 2.2.1試驗(yàn)?zāi)康?


 包括上述生命周期的C階段至D階段,，妊娠動(dòng)物自胚胎著床至硬腭閉合給藥，評(píng)價(jià)藥物對(duì)妊娠動(dòng)物,、胚胎及胎仔發(fā)育的影響,。



 評(píng)價(jià)內(nèi)容包括妊娠動(dòng)物較非妊娠雌性動(dòng)物增強(qiáng)的毒性、胚胎胎仔死亡,、生長(zhǎng)改變和結(jié)構(gòu)變化等,。



 2.2.2動(dòng)物選擇



 試驗(yàn)通常采用兩種動(dòng)物：一種為嚙齒類動(dòng)物，推薦用大鼠,；另一種為非嚙齒類動(dòng)物,，推薦用家兔,。應(yīng)說明動(dòng)物選擇的合理性。（注釋13）



 妊娠動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要,，通常大鼠不少于20只/組,，家兔不少于12只/組（注釋9）。



 2.2.3 給藥期



 由胚胎著床到硬腭閉合(即到C階段末)給藥,。通常,，大鼠為妊娠第6～15天給藥，家兔為妊娠第6～18天給藥,。



 2.2.4 動(dòng)物處理



 在大約分娩前處死并檢查雌性動(dòng)物,，正常情況下，大鼠約為妊娠第20/21天,，家兔約為妊娠第28/29天。檢查所有胎仔的存活和畸形情況,。



 當(dāng)所用技術(shù)方法要求分別檢查軟組織和骨骼改變時(shí)，最好是每窩分配50%的胎仔進(jìn)行骨骼檢查,。不管使用何種方法,，至少應(yīng)對(duì)50%的大鼠胎仔進(jìn)行內(nèi)臟檢查,。對(duì)于家兔，檢測(cè)軟組織改變,，采用新鮮顯微解剖技術(shù)較適合， 此時(shí),，100%的家兔胎仔需進(jìn)行軟組織和骨骼檢查。



 在評(píng)價(jià)胎仔的內(nèi)臟和骨骼異常情況時(shí),，若高劑量組與對(duì)照組無顯著性差異,，一般不需要對(duì)中、低劑量組動(dòng)物進(jìn)行檢查,。但建議保存固定的標(biāo)本以備檢查,。



 2.2.5 觀察指標(biāo)



 試驗(yàn)期間：



 - 體征和死亡情況，至少1次/天



 - 體重和體重變化,，至少2次/周(注釋12)



 - 攝食量,，至少1次/周



 - 其他毒性研究中已證明有意義的指標(biāo)



 終末檢查：



 - 剖檢所有成年動(dòng)物



 - 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官，必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查,，同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物相應(yīng)器官以便比較



 - 計(jì)數(shù)黃體數(shù),，活胎、死胎、吸收胎并計(jì)算著床數(shù)(注釋12)



 - 胎仔體重,，胎仔頂臀長(zhǎng)



 - 胎仔異常（包括外觀,、內(nèi)臟,、骨骼）



 - 胎盤肉眼觀察



 2.3 圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)（III段）



 2.3.1試驗(yàn)?zāi)康?


 包括上述生命周期中的C階段至F階段,，檢測(cè)從胚胎著床到幼仔離乳給藥對(duì)妊娠/哺乳的雌性動(dòng)物以及胚胎和子代發(fā)育的不良影響；由于對(duì)此段所造成的影響可能延遲,，試驗(yàn)應(yīng)持續(xù)觀察至子代性成熟階段,。



 評(píng)價(jià)內(nèi)容包括妊娠動(dòng)物較非妊娠雌性動(dòng)物增強(qiáng)的毒性、出生前和出生后子代死亡情況,、生長(zhǎng)發(fā)育的改變以及子代的功能缺陷,，包括F1代的行為、性成熟和生殖功能,。



 2.3.2動(dòng)物選擇



 至少采用一種動(dòng)物,，推薦用大鼠。妊娠動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿足數(shù)據(jù)分析的需要,，通常大鼠不少于20只/組（注釋9）,。



 2.3.3 給藥期



 雌性動(dòng)物給藥期應(yīng)從胚胎硬腭閉合至哺乳結(jié)束(即上述生命周期中的C階段至E階段)，通常,，大鼠為妊娠第15天至離乳（出生后第21天）,。



 該段試驗(yàn)并不完全包括由離乳期至青春期階段給藥，也不研究育齡期縮短的可能性,。為了檢測(cè)可能用于嬰幼兒和兒童期藥物的不良影響,，應(yīng)考慮具體情況，選擇特定年齡段子代直接給藥,，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)研究,。



 2.3.4 動(dòng)物處理



 雌性動(dòng)物分娩并飼養(yǎng)其子代至離乳，每窩選擇雌,、雄子代各1只,，飼養(yǎng)至成年，然后進(jìn)行交配檢測(cè)其生殖能力,。



 2.3.5 觀察指標(biāo)



 試驗(yàn)期間(母體動(dòng)物)：



 - 體征和死亡情況,，至少1次/天



 - 體重及體重變化，分娩前至少2次/周（注釋12）



 - 攝食量,，分娩前至少1次/周



 - 其他毒理研究中已證明有意義的指標(biāo)



 - 妊娠期



 - 分娩



 終末檢查（用于母體,，可行時(shí)也用于子代)：



 - 剖檢所有成年動(dòng)物



 - 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官，必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查,，同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物相應(yīng)器官以便比較



 - 著床(注釋12)



 - 畸形



 - 出生時(shí)存活的子代



 - 出生時(shí)死亡的子代



 - 子代出生時(shí)體重



 - 離乳前后的存活率和生長(zhǎng)/體重,，性成熟程度和生育力,，應(yīng)說明是否進(jìn)行了窩仔動(dòng)物剔除



 - 體格發(fā)育(注釋14)



 - 感覺功能和反射(注釋14)



 - 行為(注釋14)



 3、其他試驗(yàn)方案



 可根據(jù)受試物,、擬用適應(yīng)癥及臨床用藥等特點(diǎn),，綜合考慮其他試驗(yàn)方案，以全面,、合理地反映受試物的生殖毒性特點(diǎn)（注釋6）,。以下為可采用的其他試驗(yàn)方案的兩個(gè)例子。此外,，能全面,、合理地反映受試物生殖毒性特點(diǎn)的試驗(yàn)方案也是可以接受的。



 3.1 單一（全程）試驗(yàn)設(shè)計(jì)（嚙齒類動(dòng)物）



 如果將生育力和圍產(chǎn)期試驗(yàn)連貫在一起全程給藥,，則可對(duì)生殖過程從A到F各階段的情況進(jìn)行評(píng)價(jià),。假如該試驗(yàn)中包括了對(duì)胎仔的檢查，且在足夠高的給藥劑量下得出了明確的陰性結(jié)果,，可不再進(jìn)行進(jìn)一步的嚙齒類動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn),。



 胎仔結(jié)構(gòu)異常檢查也可在附加的一項(xiàng)（或多項(xiàng)）胚胎-胎仔發(fā)育試驗(yàn)中進(jìn)行，而成為兩段試驗(yàn),。



 此外,，還應(yīng)進(jìn)行第二種動(dòng)物胚胎-胎仔發(fā)育影響試驗(yàn),。推薦采用家兔,。



 3.2 兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)（嚙齒類動(dòng)物）



 如果其中包括對(duì)胎仔的檢查，最簡(jiǎn)單的兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)為生育力試驗(yàn)和圍產(chǎn)期試驗(yàn),。目前研究認(rèn)為,，如果受試物在動(dòng)物中的暴露量達(dá)到人體暴露量以上的足夠范圍時(shí)，圍產(chǎn)期試驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)其對(duì)產(chǎn)前發(fā)育有影響,，那么在大多數(shù)情況下,，再進(jìn)行胎仔檢查也不能顯著改變其危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)的結(jié)果。



 生育力試驗(yàn)中雌性動(dòng)物給藥期可持續(xù)至胚胎硬腭閉合,，并參照胚胎-胎仔發(fā)育試驗(yàn)中的方法對(duì)胎仔進(jìn)行檢查,。這種與圍產(chǎn)期試驗(yàn)聯(lián)合考慮的兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可進(jìn)行“常用的試驗(yàn)方案”中要求的所有檢查,。



 此外,，還應(yīng)進(jìn)行第二種動(dòng)物胚胎-胎仔發(fā)育影響試驗(yàn)。推薦采用家兔,。



 （三）毒代動(dòng)力學(xué)



 本指導(dǎo)原則中的毒代動(dòng)力學(xué),，系指結(jié)合生殖毒性試驗(yàn)進(jìn)行的考察藥物系統(tǒng)暴露的代謝動(dòng)力學(xué)研究。毒代動(dòng)力學(xué)可以描述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的系統(tǒng)暴露與暴露劑量,、暴露時(shí)間和毒理學(xué)結(jié)果之間的關(guān)系,。本指導(dǎo)原則中毒代動(dòng)力學(xué)研究的主要目的在于分析生殖毒性試驗(yàn)的結(jié)果,，并利于不同的毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果間進(jìn)行科學(xué)合理的比較，為臨床用藥的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考,。



 毒代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)應(yīng)選擇合適的時(shí)間點(diǎn)采樣測(cè)定,，從而獲得藥時(shí)曲線下面積（AUC）、峰濃度（Cmax）,、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等參數(shù),。某些藥物應(yīng)結(jié)合藥物血漿蛋白結(jié)合率來評(píng)價(jià)系統(tǒng)暴露量。毒代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)可以來自生殖毒性試驗(yàn)的全部動(dòng)物,，也可以來自部分動(dòng)物,。毒代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)應(yīng)包括胎仔/幼仔數(shù)據(jù)，以評(píng)價(jià)藥物和/或代謝產(chǎn)物能否通過胎盤屏障,、能否通過乳汁分泌,。此部分動(dòng)物可以包括低、中,、高劑量組的動(dòng)物,，以便估算高劑量藥物在動(dòng)物體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程是否屬非線性動(dòng)力學(xué)過程。



 建議創(chuàng)新性藥物進(jìn)行毒代動(dòng)力學(xué)研究,。



 四,、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)



 動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn)的最終目的在于預(yù)測(cè)人體可能出現(xiàn)的生殖、發(fā)育相關(guān)的毒性反應(yīng),。試驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)是試驗(yàn)的必要組成部分,，應(yīng)對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行科學(xué)和全面的分析和評(píng)價(jià)。



 （一）統(tǒng)計(jì)分析



 選用合適的統(tǒng)計(jì)方法,，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,。應(yīng)說明所選用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的合理性。



 “顯著性”檢驗(yàn)可幫助分析試驗(yàn)結(jié)果,。結(jié)果解釋本身必須以生物學(xué)的合理性為依據(jù),。僅僅因?yàn)闆]有“統(tǒng)計(jì)學(xué)意義”而認(rèn)為與對(duì)照組結(jié)果的差別并非生物學(xué)因素所致的推論可能是錯(cuò)誤的。從某種程度上講,，認(rèn)為有“統(tǒng)計(jì)學(xué)意義”的差別一定與生物性因素有關(guān)也可能是錯(cuò)誤的,。特別是對(duì)那些呈偏態(tài)分布的低發(fā)生率的異常表現(xiàn)（例如，胚胎死亡,、畸胎）,，相關(guān)各變量的可信區(qū)間可提示可能的作用大小。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)程序時(shí),，應(yīng)考慮組間比較所采用的指標(biāo)單位：通常用窩而不是胎仔個(gè)體為單位,，若親代兩種性別動(dòng)物均給藥，則用交配對(duì)（也即兩代試驗(yàn)研究中親代的配對(duì)）為單位,。



 （二）數(shù)據(jù)報(bào)告



 建議將試驗(yàn)數(shù)據(jù)制成表格,，以說明每只動(dòng)物的試驗(yàn)結(jié)果,。試驗(yàn)組總體數(shù)據(jù)的表達(dá)形式從生物學(xué)角度看是合理的（即避免不真實(shí)的精確度），并反映變量的分布情況,。各試驗(yàn)數(shù)據(jù)（如體重,、攝食量、每窩的相應(yīng)數(shù)據(jù)）制成的附錄或表格應(yīng)盡可能簡(jiǎn)明,，用絕對(duì)值而不是計(jì)算值來表示各數(shù)據(jù),；應(yīng)避免不必要的重復(fù)。



 對(duì)低發(fā)生率的觀察結(jié)果（如體征,、尸解發(fā)現(xiàn),、畸形等）制表時(shí)，建議將陽性的幾個(gè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)一同列表,。尤其是針對(duì)結(jié)構(gòu)改變（胎仔畸形）的數(shù)據(jù),，應(yīng)該在表格中清楚地標(biāo)明出現(xiàn)異常胎仔的窩號(hào)和各窩受影響的胎仔（號(hào)），并寫明受影響各胎仔被觀察到的全部改變,。如果必要,，可根據(jù)異常改變的類型從原始表中總結(jié)出其他派生的表格。



 （三）結(jié)果分析



 通常情況下,，應(yīng)對(duì)受試物在動(dòng)物中表現(xiàn)出來的生殖和發(fā)育兩方面的毒性進(jìn)行分析評(píng)價(jià),。如果出現(xiàn)陽性的生殖毒性或發(fā)育毒性結(jié)果，應(yīng)評(píng)估人體中出現(xiàn)生殖毒性和發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)的可能性,，這些陽性的毒性結(jié)果可能是在生殖毒性或一般毒性試驗(yàn)中出現(xiàn)的,，也可能是在人體研究中出現(xiàn)的。以下為常規(guī)需要分析評(píng)價(jià)的毒性：



 1,、生殖毒性



 生殖毒性為可能影響F0代生殖能力的結(jié)構(gòu)和功能性改變,，包括對(duì)生育力,、分娩和哺乳的毒性影響等,。



 生育力 與給藥相關(guān)的雄性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官的退變或壞死、精子計(jì)數(shù)減少,、精子活力或形態(tài)學(xué)改變,、交配行為異常、不能交配,、內(nèi)分泌功能改變或總體生育力降低,。與給藥相關(guān)的雌性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官損傷、配子成熟和釋放相關(guān)的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)改變,、交配行為異常,、不能交配或總體生育力降低。



 分娩 對(duì)動(dòng)物產(chǎn)程和分娩的影響可表現(xiàn)為分娩起始和持續(xù)時(shí)間的改變,。分娩持續(xù)時(shí)間通常報(bào)告為平均每胎耗時(shí),，或總分娩時(shí)間,。



 哺乳 哺乳期給藥后，可能對(duì)幼仔產(chǎn)生暴露,，也可能改變母鼠的哺乳過程（乳汁質(zhì)量和數(shù)量）或改變母鼠的哺乳行為,。



 2、發(fā)育毒性



 發(fā)育毒性為對(duì)F1代的毒性影響,，包括死亡,、畸形（結(jié)構(gòu)異常）、生長(zhǎng)異常和功能性毒性等,。



 死亡 由于發(fā)育毒性導(dǎo)致的死亡可能發(fā)生于自妊娠早期到離乳后的任何時(shí)間（“胚胎-胎仔死亡”僅是發(fā)育毒性所致死亡的一種）中,。陽性結(jié)果可能表現(xiàn)為著床前或著床后丟失、早期或晚期吸收,、流產(chǎn),、死產(chǎn)、新生仔死亡或離乳后死亡,。



 畸形 即通常所指的結(jié)構(gòu)異常,，表現(xiàn)為子代骨骼或軟組織畸形或變異。



 生長(zhǎng)異常 通常表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲滯,，有時(shí)生長(zhǎng)過快或早熟也被認(rèn)為是生長(zhǎng)異常,。評(píng)估生長(zhǎng)速率的最常用指標(biāo)為體重，同時(shí)也可測(cè)定頂臀長(zhǎng),、肛門與生殖器間距離等,。



 功能性毒性 包括任何正常生理或生化功能的持續(xù)改變，但通常僅測(cè)定神經(jīng)行為和生殖功能,。常規(guī)測(cè)定指標(biāo)包括自主活動(dòng),、學(xué)習(xí)記憶、反射,、性成熟時(shí)間,、交配行為和生育力。



 3,、其他



 很多情況下,，親代和子代所表現(xiàn)出來的生殖毒性可能是母體毒性所繼發(fā)的。應(yīng)結(jié)合相關(guān)毒性研究結(jié)果,，如長(zhǎng)期毒性研究等,，判斷表現(xiàn)出來的生殖毒性是否為母體毒性的繼發(fā)結(jié)果。



 （四）綜合評(píng)價(jià)



 生殖毒性研究是藥物安全性評(píng)價(jià)與藥物整體開發(fā)進(jìn)程的一個(gè)有機(jī)組成部分,。生殖毒性研究不能與藥效學(xué),、藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒理學(xué)研究割裂，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)力求與其他藥理毒理試驗(yàn)結(jié)果互為印證,、說明和補(bǔ)充,。



 在對(duì)生殖毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí),，應(yīng)結(jié)合以下信息進(jìn)行綜合分析：（1）受試物的藥學(xué)特點(diǎn)；（2）藥效學(xué),、藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒理學(xué)研究的結(jié)果,，特別是長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果；（3）臨床研究受試者人群特征以及已取得的臨床研究的結(jié)果,。中藥,、天然藥物還應(yīng)結(jié)合處方組成特點(diǎn)、方中藥味毒性情況,、臨床應(yīng)用背景情況等進(jìn)行綜合分析,。



 試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)最終應(yīng)落實(shí)到臨床研究受試者范圍限定、風(fēng)險(xiǎn)效益評(píng)估以及必要防治措施的制定和應(yīng)用上,。



 五,、生殖毒性研究的階段性



 1、化學(xué)藥物



 根據(jù)受試物,、擬用適應(yīng)癥特點(diǎn),，特別是臨床研究受試人群的特點(diǎn)，可分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究,。通常情況下,，應(yīng)在臨床研究開始前提供完整的生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)、胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)資料,，圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn)資料可在上市申請(qǐng)時(shí)提供,。



 但是，在一些特殊情況下,，可能會(huì)需要提前提供相關(guān)生殖毒性研究資料,，例如用于育齡人群并可能對(duì)生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥（如避孕藥、性激素,、治療性功能障礙,、促精子生成藥以及致突變?cè)囼?yàn)陽性或有細(xì)胞毒作用等的新藥）；而在另外一些情況下可能會(huì)適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時(shí)間,，例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的藥物等,。上述特殊情況下需要進(jìn)行的生殖毒性試驗(yàn)內(nèi)容也需要根據(jù)具體情況來確定,。（注釋15）



 2,、中藥及天然藥物



 新的有效成分及其制劑、新的中藥材及其制劑,，可參考化學(xué)藥物要求分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究,。



 對(duì)于其他需進(jìn)行生殖毒性研究的中藥、天然藥物,，如用于育齡人群并可能對(duì)生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥（如避孕藥,、性激素,、治療性功能障礙、促精子生成藥,、保胎藥以及致突變?cè)囼?yàn)陽性或有細(xì)胞毒作用等的藥物）,，應(yīng)根據(jù)具體情況提供相應(yīng)的生殖毒性研究資料，這時(shí)需根據(jù)具體情況來確定生殖毒性試驗(yàn)內(nèi)容及進(jìn)行的時(shí)間,。



 在一些情況下可能會(huì)適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時(shí)間,，例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的治療藥物等。



 六,、參考文獻(xiàn)



 1,、生殖毒性試驗(yàn)。見：新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué),、藥理學(xué),、毒理學(xué)）。中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局,，1993:216-217



 2,、生殖毒性和發(fā)育毒性。見：周宗燦主編,，毒理學(xué)基礎(chǔ),，第二版。北京醫(yī)科大學(xué)出版社,。北京,，2000: 128-143



 3、ICH Steering Committee. Harmonised Tripartite Guideline S5A: Detection of toxicity to reproduction for medicinal products.



 4,、ICH Steering Committee. Harmonised Tripartite Guideline S5B: Maintenance of the ICH guideline on toxicity to male fertility.



 5,、ICH Steering Committee. Harmonised Tripartite Guideline M3: Non-clinical safety studies for the conduct of human clinical trials for pharmaceuticals.



 6、生殖發(fā)生毒性試驗(yàn),。見：日本臨床前研究指導(dǎo)原則解說,。藥事日?qǐng)?bào)社，2002：49-62



 7,、Omori Y. Principles and guidelines a review of recommendations ( on detection of toxicity ) in the three regions. In: P.F. D’Arcy and D.W.G. Harron edited, Proceedings of the First International Conference on Harmonization. Brussels 1991: 256-266



 8,、EEC guidelines: Detection of toxicity to reproduction for medicinal products including toxicity to male fertility.



 9、FDA. Reviewer guidance: Integration of study results to assess concerns about human reproductive and developmental toxicities.



 七,、著者



 《藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組,。



 八、相關(guān)注釋



 注釋1：妊娠動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)



 由于妊娠和哺乳期動(dòng)物存在生理方面的迅速變化,，其藥代動(dòng)力學(xué)可能出現(xiàn)改變,，最好采用分段（分二段或三段）的研究方法 。在制定試驗(yàn)研究計(jì)劃的過程中，藥代動(dòng)力學(xué)資料（常來源于非妊娠動(dòng)物）,，可為判斷動(dòng)物種屬的總體適用性提供信息,，也可有助于研究方案的確立和劑量的設(shè)定。在試驗(yàn)過程中,，藥代動(dòng)力學(xué)研究可以為設(shè)定給藥劑量提供參考,，也可提示其與預(yù)期結(jié)果是否存在明顯偏差。



 注釋2：動(dòng)物選擇



 應(yīng)注意選用與人類相關(guān)的動(dòng)物,。如果已有的藥代動(dòng)力學(xué),、藥理毒理研究信息能顯示某種屬與人類相關(guān)，則可僅采用此一種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn),。如果某一種屬動(dòng)物未表現(xiàn)出（與第一種動(dòng)物相同的）與人類的相似性,，則將其選作第二種動(dòng)物的價(jià)值很小。



 所有的動(dòng)物種屬都有其優(yōu)點(diǎn),，例如,，大鼠，其次是小鼠,，都可用作進(jìn)行生殖毒性研究通用的較佳動(dòng)物種屬,。家兔作為非嚙齒類動(dòng)物用于胚胎毒性研究，也可用于生育力研究,。家兔和犬的精液樣品可不借助于痛苦性的技術(shù)（如電刺激采精）而獲得,，可用于精液分析研究。



 其他大多數(shù)動(dòng)物種屬通常不適合用于生殖毒性研究,，這些動(dòng)物可能僅僅適合用于進(jìn)行某些特定的試驗(yàn)研究,。



 所有動(dòng)物種屬都有其不足之處，例如：



 大鼠：對(duì)性激素敏感,；不適合用于多巴胺受體激動(dòng)劑的研究,，因其早期妊娠的發(fā)生和維持所依賴的激素主要是催乳素；妊娠后期對(duì)非甾體抗炎藥高度敏感,。



 小鼠：代謝率高,，易驚、群體畸形現(xiàn)象（所有種屬動(dòng)物均會(huì)出現(xiàn)）特別明顯,，胎仔小,。



 家兔：常缺乏藥代動(dòng)力學(xué)和毒理資料，對(duì)一些抗生素和消化道功能紊亂敏感,，臨床表現(xiàn)的解釋較困難,。



 豚鼠：常缺乏藥代動(dòng)力學(xué)和毒理資料，對(duì)一些抗生素和消化道功能紊亂敏感,，胎仔發(fā)育期長(zhǎng),，歷史背景資料不足,。



 家豬和/或小型豬：群體畸形的背景情況多變,所需的受試物量大,，需要較大飼養(yǎng)空間,，歷史背景資料不足。



 白鼬：如果不采用特殊的管理系統(tǒng),，只能季節(jié)性繁殖（其成功與否主要取決于人和動(dòng)物的相互影響）,，歷史背景資料不足。



 倉(cāng)鼠：靜脈給藥雖非不可能,，但相當(dāng)困難,，會(huì)將受試物存于頰部小囊中而影響實(shí)際給藥量，攻擊性非常強(qiáng),，對(duì)腸道功能紊亂敏感,，對(duì)許多受試物有過度敏感的致畸反應(yīng)，胎仔小,。



 犬：季節(jié)性繁殖,，多近親繁殖，歷史背景資料不足,。



 非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物：與其他種屬動(dòng)物一樣,，其藥代動(dòng)力學(xué)情況與人不同，歷史背景資料不足,，常常因?yàn)槠渲粩?shù)太少而難以進(jìn)行危險(xiǎn)性評(píng)估,。更適合用于進(jìn)行明確生殖毒性物質(zhì)（該毒性已比較肯定）特性的試驗(yàn)研究，而不是評(píng)估其危險(xiǎn)性,。



 注釋3：整體動(dòng)物以外的其他試驗(yàn)系統(tǒng)



 已經(jīng)建立了一些整體動(dòng)物以外的其他試驗(yàn)系統(tǒng),，并在預(yù)試驗(yàn)研究（“預(yù)篩選”或“優(yōu)先選擇”）和后續(xù)試驗(yàn)研究中采用。為對(duì)同系的一組受試物進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),，研究清楚其中至少一種受試物對(duì)整體動(dòng)物的可能作用較為重要（可推斷其作用）,。據(jù)此，可選擇一些受試物進(jìn)行更進(jìn)一步的試驗(yàn),。



 從后續(xù)研究或進(jìn)一步明確受試物的作用特征上考慮,，其他試驗(yàn)系統(tǒng)可能有助于詳細(xì)研究某些可觀察到的發(fā)育過程，例如,，揭示具體毒性機(jī)理,、明確（藥物）濃度-反應(yīng)關(guān)系、選擇“敏感（生長(zhǎng)發(fā)育）階段”,，或檢測(cè)已知代謝產(chǎn)物的作用,。



 注釋4：劑量選擇



 劑量選擇是生殖毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵問題之一?？筛鶕?jù)已有的研究資料來選擇高劑量,，如果已有資料信息不足,，應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。大約2～4周重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)研究的周期,，與各段生殖毒性研究設(shè)計(jì)的很接近,。若選擇與重復(fù)給藥毒性研究相似的劑量，可參考全身毒性表現(xiàn),，以分析對(duì)生育力方面的影響,。



 生殖毒性研究中存在許多可變因素，劑量-反應(yīng)關(guān)系趨勢(shì)的存在與否,，是判斷效應(yīng)與藥物相關(guān)性的一個(gè)關(guān)鍵性依據(jù),。由于劑量-反應(yīng)關(guān)系曲線可能是陡直的，故不建議設(shè)計(jì)寬的劑量間距,。若試圖通過一項(xiàng)研究來分析效應(yīng)的劑量-反應(yīng)關(guān)系,，應(yīng)至少設(shè)三個(gè)劑量組和適當(dāng)?shù)膶?duì)照組。若還不能確定其劑量-反應(yīng)關(guān)系,，應(yīng)增設(shè)劑量組,，避免劑量間距過大，并應(yīng)確定生殖毒性方面“未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平”,。



 在劑量選擇時(shí)參考藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果是重要的,，若劑量的增加并不導(dǎo)致血漿和組織中濃度的升高，則增加劑量的意義很小,。劑量間距的大小取決于藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒性研究結(jié)果,。應(yīng)優(yōu)先考慮盡量小的劑量間距。



 注釋5：給藥途徑選擇



 通常,，給藥途徑與臨床擬用途徑一致,，但如果藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，某種給藥途徑下機(jī)體中的暴露量（如AUC）更高,，此時(shí),，選用暴露量更小或?qū)嶋H操作相當(dāng)困難的給藥途徑（如吸入給藥）的意義可能較小。



 經(jīng)口給藥,，通常使用灌胃給藥法,。摻食法（飼料/飲水）給藥時(shí)，往往達(dá)不到預(yù)期劑量或不能準(zhǔn)確給藥,，因此一般不采用,。



 注射給藥，應(yīng)注意受試物的性狀及其局部安全性,。靜脈注射時(shí),，應(yīng)注意控制注射速度，防止藥液泄漏,。腹腔注射時(shí)可能會(huì)對(duì)子宮或胎仔直接產(chǎn)生作用,，故采用妊娠動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí),，一般不用該途徑。



 有時(shí)也可采用皮下或肌內(nèi)注射途徑,。



 對(duì)于臨床上局部應(yīng)用（皮膚,、眼、耳等）的受試物,，可采用其他的給藥途徑替代,。皮膚給藥時(shí),，應(yīng)避免動(dòng)物舔食,、與籠子摩擦和剃毛時(shí)的皮膚損傷。皮膚給藥的替代途徑,，可采用吸收途徑類似的皮下注射,。



 當(dāng)選擇的給藥途徑與臨床擬用途徑不同時(shí)，應(yīng)說明依據(jù),。



 注釋6：試驗(yàn)方案選擇



 對(duì)于化學(xué)藥物來說,，如果給藥劑量達(dá)2g/kg而不致死，且重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)劑量達(dá)1g/kg時(shí)未出現(xiàn)毒性,，可僅進(jìn)行單項(xiàng)包括兩代的生殖毒性試驗(yàn),，包括兩受試物組（0.5 g/kg和1.0 g/kg）與一個(gè)對(duì)照組。但應(yīng)關(guān)注種屬動(dòng)物選擇的合理性以及受試物有效性,。



 此外,，對(duì)多巴胺受體激動(dòng)劑或減少循環(huán)中催乳素水平的受試物，雌性大鼠為較差的模型動(dòng)物,，而家兔可能是用于上述受試物所有生殖毒性研究的更好的動(dòng)物種屬,，但目前似乎尚未進(jìn)行這種嘗試。若有證據(jù)顯示家兔的代謝方式比大鼠與人更接近,，則家兔也可用于其他類型受試物的生殖毒性研究,。



 注釋7：常規(guī)試驗(yàn)與后續(xù)試驗(yàn)



 常規(guī)試驗(yàn)（指導(dǎo)原則規(guī)定的試驗(yàn)）在不同程度上具有難以判斷的特點(diǎn)，即對(duì)某一指標(biāo)影響的產(chǎn)生,，可能有多種不同原因,。例如，出生時(shí)每窩幼仔數(shù)的減少可能是因?yàn)榕怕崖剩S體數(shù)）的減少,、著床前死亡率的提高,，或因?yàn)橹埠笏劳雎驶虺錾罅⒓此劳雎实脑黾铀隆６鲜鏊劳隹赡苁瞧湓缙谔ンw畸形的后果,，由于隨后的繼發(fā)性改變等原因,，該畸形不能夠再觀察到。尤其是那些在對(duì)照組中已表現(xiàn)出的低發(fā)生率的反應(yīng),，給藥所致影響與偶然出現(xiàn)的情況間的區(qū)別,，就要根據(jù)其與其他類型影響的關(guān)系來判斷,。因此，若發(fā)現(xiàn)對(duì)某一指標(biāo)的影響,，應(yīng)考慮進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)以探索其可能的聯(lián)系,，明確其毒性的性質(zhì)、范圍和原因,，也包括判斷其劑量-反應(yīng)關(guān)系以便有助于其危險(xiǎn)性評(píng)價(jià),。這不同于常規(guī)試驗(yàn)的情況，此時(shí)劑量-反應(yīng)關(guān)系存在與否,，將有助于區(qū)別給藥所致影響與偶然情況的不同,。



 注釋8：計(jì)時(shí)方法



 本指導(dǎo)原則中，妊娠的計(jì)時(shí)方法為以觀察到陰道涂片精子陽性和/或陰栓的日期計(jì)為妊娠第0天,。大鼠和家兔的著床發(fā)生在妊娠的第6～7天,，硬腭閉合在第15～18天。



 其他計(jì)時(shí)方法也可接受,，但必須在報(bào)告中明確說明,。另外，研究者必須在不同的研究中保持計(jì)時(shí)方法的一致性,，以確保給藥過程中不出現(xiàn)空隙,。建議在相關(guān)研究的給藥期之間，應(yīng)設(shè)計(jì)至少一天的重疊期,。



 交配時(shí)間會(huì)影響胎仔和幼仔相關(guān)參數(shù)的變異性,，應(yīng)確認(rèn)準(zhǔn)確的交配時(shí)間。



 通常,，幼仔動(dòng)物的出生日即計(jì)為產(chǎn)后或哺乳的第0天,。可借助準(zhǔn)確的交配日期來判斷是否出現(xiàn)分娩延遲或滯產(chǎn),。



 注釋9：動(dòng)物數(shù)



 對(duì)動(dòng)物數(shù)的要求,，總體原則是滿足數(shù)據(jù)分析的需要?？紤]到國(guó)內(nèi)的現(xiàn)實(shí)情況,，本指導(dǎo)原則中仍然保留了對(duì)動(dòng)物數(shù)的最低要求。該要求主要參考了ICH相關(guān)會(huì)議紀(jì)要中美國(guó),、歐盟,、日本對(duì)動(dòng)物數(shù)要求。



 注釋10：給藥時(shí)間



 生育力試驗(yàn),，尤其減少雄性動(dòng)物交配前給藥期,，應(yīng)根據(jù)前期試驗(yàn)所積累的資料以及對(duì)精子發(fā)生過程基礎(chǔ)研究的再評(píng)價(jià)而設(shè)計(jì)（對(duì)精子發(fā)生的研究以往尤其要求較長(zhǎng)的交配前給藥期）。但選擇性影響雄性生殖功能的受試物是罕見的,，通過與雌性動(dòng)物交配來觀察受試物對(duì)精子發(fā)生影響這一方法是不靈敏的,；而充分的雄性動(dòng)物生殖器官病理學(xué)和組織病理學(xué)檢查(如通過Bouin's固定,、石蠟包埋、睪丸2～4 μm橫切片,，附睪縱切片,，PAS和蘇木素染色)則是檢查對(duì)精子發(fā)生的影響的一種更為敏感和快捷的方法。影響精子發(fā)生的受試物一般作用于分裂后期,。尚無僅通過雄性動(dòng)物給藥9～10周并與雌性交配,，來發(fā)現(xiàn)雄性生殖方面毒性的有說服力的例子（試驗(yàn)）。生育力試驗(yàn)可對(duì)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中組織學(xué)檢查不能觀察到的受試物對(duì)雄性生育力的功能性影響,，以及對(duì)雌雄動(dòng)物交配行為的影響進(jìn)行評(píng)價(jià),。



 重復(fù)給藥試驗(yàn)可提供受試物對(duì)精子發(fā)生的潛在影響的信息。評(píng)價(jià)對(duì)精子的影響應(yīng)參考至少1個(gè)月的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)的結(jié)果,。如果在1個(gè)月以上的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用,，那么在交配前雄性動(dòng)物給藥周期可縮短至4周,。



 已有研究顯示大鼠精子發(fā)生（包括精子成熟）整個(gè)過程需63天,，若已有的資料提示生育力的研究范圍需擴(kuò)大或需明確其作用性質(zhì)，則應(yīng)合理設(shè)計(jì)試驗(yàn)以對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究,。



 注釋11：動(dòng)物處理



 雌雄動(dòng)物比例：雌雄動(dòng)物最好以1:1比例進(jìn)行交配,，因?yàn)椴还苁菫榱巳〉酶叩氖茉新蔬€是為了避免試驗(yàn)結(jié)果的錯(cuò)誤分析和闡述，這都是最安全的方法,。



 交配時(shí)期和方法：大部分實(shí)驗(yàn)室采用2～3周的交配期,。 在一些實(shí)驗(yàn)室中，一旦陰道涂片陽性或查到陰栓即將雌性動(dòng)物移走,，而另一些實(shí)驗(yàn)室則繼續(xù)使雌雄動(dòng)物同籠,。大部分大鼠在同籠的最初5天內(nèi)即可交配（在第1個(gè)動(dòng)情期內(nèi)），但某些雌鼠可能出現(xiàn)假孕,。在此情況下,，可將雌雄大鼠同籠約20天，使雌性動(dòng)物重新開始動(dòng)情期以受孕,。



 終末處死：如果雌性大鼠在胚胎著床后停止給藥,，在其妊娠13～15天時(shí)處死，通?？蓾M足評(píng)價(jià)對(duì)生育力和生殖功能影響的需要,，例如可區(qū)分著床與吸收胎。為觀察不良反應(yīng)（在生育力研究中沒有必要）,，獲得后期胚胎丟失,、胎仔死亡或結(jié)構(gòu)畸形等資料，雌性動(dòng)物一般在妊娠20/21天處死,，雄性動(dòng)物建議在交配成功后處死,。結(jié)果模棱兩可時(shí),，可將雄性動(dòng)物與未給藥的雌性動(dòng)物進(jìn)行交配以檢查雄性動(dòng)物是否有生育能力。



 注釋12：觀察指標(biāo)



 本指導(dǎo)原則中僅列出常規(guī)指標(biāo),，應(yīng)根據(jù)受試物,、臨床適應(yīng)癥、用藥人群特點(diǎn)等具體情況,，增加相關(guān)觀察指標(biāo),。



 給藥期間每日對(duì)妊娠動(dòng)物稱重是有意義的。對(duì)某些受試物,，在非妊娠期（交配前,、交配期與哺乳期）則最好每周稱重2次以上。



 對(duì)明顯未妊娠的大鼠或小鼠（不包括家兔）,，可進(jìn)行子宮硫化胺染色,，以確定是否有胚胎死亡。



 注釋13：胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)中的第二種動(dòng)物



 通常胚胎-胎仔發(fā)育毒性帶來的后果相對(duì)更為嚴(yán)重,，故對(duì)其試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)更為關(guān)注,。采用多種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，在將試驗(yàn)結(jié)果外推至人時(shí)可能會(huì)有更為充分的試驗(yàn)依據(jù),。通常,，胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)需要采用至少兩種動(dòng)物進(jìn)行，推薦采用大鼠和家兔,。



 注釋14：體格發(fā)育,、感覺功能、反射和行為



 評(píng)價(jià)體格發(fā)育的最佳指標(biāo)為體重,。離乳前體格發(fā)育的標(biāo)志如耳廓張開,、毛發(fā)生長(zhǎng)、門齒萌出等均與胎仔體重具有高度相關(guān)性,。胎仔體重與交配后時(shí)間的相關(guān)性大于體重與出生時(shí)間之間的相關(guān)性,。平面翻正反射、聽覺驚跳反射,、空中翻正反射和對(duì)光反射等依賴于身體發(fā)育的狀況,。



 離乳后體格發(fā)育的兩項(xiàng)明顯標(biāo)志是雌鼠陰道張開和雄鼠龜頭包皮腺裂開。后者與睪酮水平升高有關(guān),，而睪丸下降與睪丸酮水平無關(guān),。這些標(biāo)志意味著性成熟的開始。



 功能測(cè)試：至今為止,，功能測(cè)定絕大多數(shù)為行為試驗(yàn),，雖然人們已在此方面花費(fèi)了很多精力，但尚未找到可推薦的特異性測(cè)試方法。研究者們正努力尋找可測(cè)試感覺功能,、自主活動(dòng),、學(xué)習(xí)和記憶的方法。



 注釋15：生殖毒性研究的階段性



 胚胎-胎仔發(fā)育毒性帶來的后果相對(duì)更為嚴(yán)重,，對(duì)該段試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)更為關(guān)注,，如果采用多種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，在將試驗(yàn)結(jié)果外推至人時(shí)可能會(huì)提供更為充分的試驗(yàn)依據(jù),。



 考慮到目前我國(guó)的現(xiàn)狀,，由于創(chuàng)新藥物沒有或僅有較少的可以參考的資料，需要更加關(guān)注對(duì)人體安全性,。為了將受試者（及其后代）的風(fēng)險(xiǎn)降至最低,，并為合理用藥、利弊權(quán)衡提供參考,，在臨床研究開始前應(yīng)盡可能了解受試物對(duì)雌雄動(dòng)物生殖能力,、生殖器官、生殖細(xì)胞以及早期胚胎發(fā)育的影響,。因此,，目前要求生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn)和胚胎-胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn)在臨床試驗(yàn)開始前完成。



 在某些特殊情況下,，如用于艾滋病,、晚期惡性腫瘤等治療的藥物以及用于生殖控制、孕婦等特殊人群的藥物,，可靈活考慮生殖毒性的要求，如研究?jī)?nèi)容和具體設(shè)計(jì),、動(dòng)物種屬和階段性等,。



 此外，在常規(guī)試驗(yàn)后,，發(fā)現(xiàn)了某些不良影響,，為弄清該影響的實(shí)質(zhì)及其發(fā)生的機(jī)理而外推至人，進(jìn)行適當(dāng)?shù)暮罄m(xù)試驗(yàn)是很重要的,。對(duì)于后續(xù)試驗(yàn)的時(shí)間安排應(yīng)視具體情況靈活掌握,。