• 【發(fā)布單位】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【發(fā)布文號(hào)】國(guó)食藥監(jiān)注[2007]643號(hào)
• 【發(fā)布日期】2007-10-23
• 【生效日期】2007-10-23
• 【失效日期】--
• 【文件來(lái)源】國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局
• 【所屬類別】政策參考

合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則

合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則
 
(國(guó)食藥監(jiān)注[2007]643號(hào))





各省,、自治區(qū)、直轄市食品藥品監(jiān)督管理局（藥品監(jiān)督管理局）：



 為科學(xué)規(guī)范和指導(dǎo)藥物研究工作,，國(guó)家局組織制定了《吸入制劑質(zhì)量控制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《化學(xué)藥物口服緩釋制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,、《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥物非臨床依賴性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》5個(gè)藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則,，現(xiàn)予發(fā)布，請(qǐng)參照?qǐng)?zhí)行,。



國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局

二○○七年十月二十三日





合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則



 一,、前言

 多肽類化合物是一類重要的生物活性分子。20世紀(jì)70年代生物技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用,，使多肽等生物技術(shù)藥物的研究進(jìn)展迅速,；與此同時(shí),，隨著多肽固相合成技術(shù)及高效液相色譜（HPLC）純化、分析技術(shù)等的發(fā)展,，合成多肽藥物的開(kāi)發(fā)也成為藥物研究中的一個(gè)活躍領(lǐng)域,。

 采用化學(xué)合成方法制備多肽，可以對(duì)天然多肽的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾,，從而增加多肽與受體的親和力,、選擇性，增強(qiáng)對(duì)酶降解的抵抗力或改善藥代動(dòng)力學(xué)特性,，甚至由受體的激動(dòng)劑變?yōu)檗卓箘?；此外，新技術(shù)的發(fā)展,，例如以多肽固相合成和組合化學(xué)為基礎(chǔ)的組合肽庫(kù)合成技術(shù)，使得在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的多肽化合物成為可能,，藥物篩選的效率不斷提高,。因此，將會(huì)有越來(lái)越多的采用化學(xué)合成方法制備的多肽類化合物成為治療用藥物,。

 合成多肽藥物是指采用化學(xué)合成方法制備的多肽類藥物,。這類藥物的藥學(xué)研究同樣遵循國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)發(fā)布的相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則的一般性要求。但是,，由于多肽主要由氨基酸（包括天然氨基酸和非天然氨基酸）構(gòu)成,，這使得多肽類藥物在制備方法、結(jié)構(gòu)確證,、質(zhì)量研究等方面又有與一般藥物不同的獨(dú)特問(wèn)題,。本指導(dǎo)原則就是在已有的相關(guān)指導(dǎo)原則基礎(chǔ)上，對(duì)合成多肽藥物藥學(xué)研究方面所涉及的特殊問(wèn)題進(jìn)行分析,，結(jié)合國(guó)內(nèi)對(duì)多肽藥物研究和評(píng)價(jià)的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),，提出多肽藥物藥學(xué)各項(xiàng)研究的一般性要求。當(dāng)然,，具體品種研究的內(nèi)容與深度還要取決于品種本身的特性,。

 本指導(dǎo)原則適用于采用液相或固相合成方法制備的多肽藥物。

 二,、合成多肽藥物藥學(xué)研究的基本考慮

 合成多肽藥物藥學(xué)研究的主要內(nèi)容,、研究思路、研究方法及一般性的技術(shù)要求與其他類型的化學(xué)藥物基本一致,。但是,，由于多肽藥物的特點(diǎn)，在進(jìn)行藥學(xué)研究時(shí)還應(yīng)注意考慮以下問(wèn)題,。

 1,、關(guān)于多肽（原料藥）合成工藝選擇的考慮

 多肽的化學(xué)合成是有機(jī)合成的一個(gè)非常特殊的分支,，目前主要有液相合成和固相合成兩種方法。

 液相合成是經(jīng)典的多肽合成方法,，一般采用逐步合成或片段縮合方法,。逐步合成法通常從鏈的C'末端氨基酸開(kāi)始，向不斷增加的氨基酸組分中反復(fù)添加單個(gè)α-氨基保護(hù)的氨基酸,。片段縮合一般先將目標(biāo)序列合理分割為片段,，再逐步合成各個(gè)片段，最后按序列要求將各個(gè)片段進(jìn)行縮合,。液相合成的優(yōu)點(diǎn)是每步中間產(chǎn)物都可以純化,、可以獲得中間產(chǎn)物的理化常數(shù)、可以隨意進(jìn)行非氨基酸修飾,、可以避免氨基酸缺失,，缺點(diǎn)是較為費(fèi)時(shí)、費(fèi)力等,。

 固相合成是將目標(biāo)肽的第一個(gè)氨基酸的羧基以共價(jià)鍵的形式與固相載體(樹(shù)脂)相連,再以這一氨基酸的氨基為合成起點(diǎn),使其與相鄰氨基酸（氨基保護(hù)）的羧基發(fā)生?；磻?yīng),形成肽鍵。然后讓包含有這兩個(gè)氨基酸的樹(shù)脂肽的氨基脫保護(hù)后與下一個(gè)氨基酸的羧基反應(yīng),不斷重復(fù)這一過(guò)程,直至目標(biāo)肽形成為止,。其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)化了每步反應(yīng)的后處理操作,，避免因手工操作和物料轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的損失，產(chǎn)率較高且能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化等,；其缺點(diǎn)是每步中間產(chǎn)物不可以純化,，必須采用較大的氨基酸過(guò)量投料，粗品純度不如液相合成物,，必需通過(guò)可靠的分離手段進(jìn)行純化等,。

 液相合成和固相合成各有優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)合成的實(shí)際需要選擇適合的工藝,。一般而言,，液相合成法較適于合成短肽；固相合成法更適于合成中,、長(zhǎng)肽,。當(dāng)然，也可以將兩種方法結(jié)合應(yīng)用,，比如采用液相方法合成短肽片斷,，然后將該片斷應(yīng)用到固相合成中。

 無(wú)論是液相合成還是固相合成,均是按照設(shè)計(jì)的氨基酸順序,通過(guò)定向形成酰胺鍵方法得到目標(biāo)分子,。從理論上講這并不復(fù)雜,但實(shí)施起來(lái)需要考慮的因素還是比較多,。簡(jiǎn)單的羧酸與胺之間形成酰胺鍵,一般是先將羧基轉(zhuǎn)變成一個(gè)活潑的羧基衍生物(如酰氯或酸酐)再與胺作用,或者在反應(yīng)體系中加入縮合劑。但是，氨基酸之間形成酰胺鍵情況則復(fù)雜得多,這是由于每一個(gè)氨基酸既含有氨基,同時(shí)又含有羧基,。如果將一種氨基酸的羧基活化,則其可以和同一種或另一種氨基酸分子的氨基反應(yīng);如果將幾種氨基酸混合在一起,加入縮合劑,則只能得到由具有多種不同氨基酸順序的多肽組成的混合物,。因此，多肽合成的研究中不僅需要關(guān)注活化方法,、偶聯(lián)方法等,，更要關(guān)注保護(hù)/脫保護(hù)策略的選擇。

 在多肽合成過(guò)程中,，會(huì)產(chǎn)生一些與目標(biāo)肽結(jié)構(gòu)類似的雜肽,，例如因氨基酸消旋化產(chǎn)生的非對(duì)映異構(gòu)體、因部分氨基酸未連接上產(chǎn)生的缺失肽,、因肽鍵斷裂產(chǎn)生的斷裂肽等,。因此，需要考慮選擇可靠的分離和純化方法使多肽的純度達(dá)到要求,。多肽藥物的純化通常采用色譜方法,，但在一些情況下，有機(jī)合成中常見(jiàn)的純化方法（例如重結(jié)晶）也可能適用,。

 2,、關(guān)于多肽結(jié)構(gòu)確證研究的考慮

 鑒于多肽分子主要是由各種氨基酸構(gòu)成，單純運(yùn)用有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)研究常用的一些方法例如紫外光譜,、紅外光譜、核磁共振譜等來(lái)解析多肽的結(jié)構(gòu)可能有一定的困難,；一般而言,，氨基酸組成分析、質(zhì)譜,、氨基酸序列測(cè)定等對(duì)其結(jié)構(gòu)確證有重要意義,。

 氨基酸組成分析可說(shuō)明多肽的組成是否正確；質(zhì)譜可以提供分子量以及序列信息,。上述兩項(xiàng)數(shù)據(jù)除用于證明多肽的結(jié)構(gòu)外,，還能在一定程度上反映測(cè)試樣品的純度（是否含有合成雜質(zhì)）。氨基酸序列測(cè)定可以直觀地說(shuō)明氨基酸的連接順序是否正確,，對(duì)于說(shuō)明合成多肽的結(jié)構(gòu)尤其是中,、長(zhǎng)肽的結(jié)構(gòu)有非常重要的價(jià)值。

 在進(jìn)行多肽藥物的結(jié)構(gòu)研究時(shí),，應(yīng)注意結(jié)合多肽的合成工藝（包括中間體的結(jié)構(gòu)研究）,、多肽的分子大小（包括組成多肽的氨基酸數(shù)量和種類）,、擬解決的結(jié)構(gòu)問(wèn)題,、各種測(cè)試方法所能提供的結(jié)構(gòu)信息等，綜合考慮選用合適的研究方法。

 對(duì)于具有一定空間結(jié)構(gòu)才能發(fā)揮其活性的多肽,，應(yīng)進(jìn)行必要的立體化學(xué)研究,。

 3、關(guān)于多肽制劑處方工藝研究的考慮

 合成多肽藥物制劑研究的總體目標(biāo)和要求與其它類型化學(xué)藥物制劑是一致的,，即通過(guò)一系列研究工作保證制劑劑型選擇依據(jù)充分,、處方合理、工藝穩(wěn)定,、生產(chǎn)過(guò)程得到有效控制,，并能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

 但是,，由于多肽藥物的生物活性可能和其空間結(jié)構(gòu)相關(guān),，多肽分子中存在大量的酰胺鍵，另外還可能有羧基,、羥基,、氨基、巰基等較為活潑的基團(tuán),，較易水解或降解,，因此了解合成多肽藥物的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性對(duì)選擇適宜的劑型和合理的處方、制備工藝有重要作用,。

 4,、關(guān)于多肽藥物質(zhì)量研究的考慮

 多肽藥物（包括原料藥和制劑）的質(zhì)量研究的主要項(xiàng)目、相關(guān)檢測(cè)方法建立和驗(yàn)證的要求與其它類型化學(xué)藥物基本一致,。

 但是,，多肽藥物的一些特點(diǎn)在質(zhì)量研究中需要給予充分的考慮，在研究時(shí)需要增加一些特別的考察項(xiàng)目,，例如氨基酸組成分析等,；對(duì)于一些中、長(zhǎng)肽,，生物特性例如效價(jià),、免疫原性和抗原活性等也有必要進(jìn)行研究。

 此外,，由于合成工藝,、結(jié)構(gòu)等方面的獨(dú)特性，合成多肽藥物在部分質(zhì)控項(xiàng)目的檢測(cè)方法建立和方法學(xué)驗(yàn)證方面也有一些特殊的考慮,。例如,，合成多肽原料藥中工藝雜質(zhì)的來(lái)源和一般化學(xué)藥物有所不同，其可能的工藝雜質(zhì)如:缺失(不完全)肽,、斷裂肽,、去酰胺多肽,、氨基酸側(cè)鏈的不完全脫保護(hù)所形成的副產(chǎn)物、氧化肽,、二硫鍵交換的產(chǎn)物,、非對(duì)映異構(gòu)的多肽、低聚物和/或聚合物及合成中所用的毒性試劑和溶劑等,。在合成多肽藥物的有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究中需要充分考慮這些可能的工藝雜質(zhì),，對(duì)這些工藝雜質(zhì)檢出能力的驗(yàn)證是方法學(xué)驗(yàn)證的重要方面。

 5,、關(guān)于多肽藥物穩(wěn)定性研究的考慮

 由于多肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),，這類藥物的穩(wěn)定性相對(duì)較差，引起多肽藥物不穩(wěn)定的原因主要有水解,、氧化,、外消旋化、二硫鍵的斷裂及重排,、β消除,、凝聚、沉淀,、吸附等,。穩(wěn)定性研究應(yīng)根據(jù)多肽藥物穩(wěn)定性的特點(diǎn)合理選擇試驗(yàn)條件、考察項(xiàng)目,。

 三,、合成多肽藥物藥學(xué)研究的主要內(nèi)容

 合成多肽藥物的藥學(xué)研究?jī)?nèi)容和一般化學(xué)藥物一樣，主要包括原料藥的制備工藝研究和結(jié)構(gòu)確證研究,、制劑的處方工藝研究,、質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂、穩(wěn)定性研究等,。這些研究?jī)?nèi)容的一般性的技術(shù)要求也和一般化學(xué)藥物基本一致。但是,，正如前面所討論的,，多肽藥物還有一些特殊的方面需要在研究中予以考慮，以下主要是針對(duì)多肽藥物藥學(xué)研究的特殊內(nèi)容及其技術(shù)要求進(jìn)行討論,，這些技術(shù)要求也包括了對(duì)申報(bào)資料內(nèi)容的一些要求。



 （一）原料藥制備工藝研究

 1,、工藝選擇

 研究者可以根據(jù)目標(biāo)肽的結(jié)構(gòu),、自身生產(chǎn)條件等考慮選用液相合成或固相合成工藝。但無(wú)論采用何種合成工藝,，均需要提供化學(xué)反應(yīng)式,、工藝流程圖、操作過(guò)程等，對(duì)工藝參數(shù)（如投料量,、反應(yīng)條件、反應(yīng)試劑）要有詳細(xì)的描述,，包括對(duì)于多肽的修飾（例如二硫鍵的形成等）,。

 2、起始原料,、試劑的質(zhì)量控制

 （1）氨基酸及其衍生物

 氨基酸及其衍生物作為多肽合成的起始原料,，其質(zhì)量對(duì)合成多肽的質(zhì)量有重要影響，因此應(yīng)關(guān)注氨基酸及其衍生物的來(lái)源,、質(zhì)控方法等。對(duì)于起始原料的質(zhì)量控制應(yīng)足以保證其質(zhì)量的一致性,，以最終保證合成的多肽批間質(zhì)量的穩(wěn)定,。作為起始原料的氨基酸及其衍生物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般應(yīng)包括性狀,、熔點(diǎn)、比旋度,、化學(xué)純度,、色譜純度及光學(xué)純度,、含量等，其中對(duì)于起始原料的化學(xué)純度和光學(xué)純度的控制尤為重要,。

 如果使用了特殊的氨基酸或其衍生物，例如經(jīng)過(guò)復(fù)雜修飾的非天然氨基酸,、采用新工藝合成的氨基酸等,，申報(bào)資料中還應(yīng)提供其合成工藝及結(jié)構(gòu)研究的相關(guān)資料,。

 （2）樹(shù)脂

 采用固相合成方法制備多肽，應(yīng)提供樹(shù)脂的來(lái)源,、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)報(bào)告，并對(duì)樹(shù)脂的摩爾取代系數(shù),、在不同溶劑中的膨脹系數(shù),、所用合成條件下的穩(wěn)定性情況,、交聯(lián)度等予以說(shuō)明。

 常用樹(shù)脂包括聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹(shù)脂,、聚丙烯酰胺和聚乙烯-乙二醇類樹(shù)脂及衍生物等,，應(yīng)根據(jù)目標(biāo)多肽C末端氨基酸的不同類型（如羧酸型、酰胺型等）選擇特定用途的樹(shù)脂,，并說(shuō)明選擇的依據(jù),。

 （3）試劑和溶劑

 可以參考《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》的基本要求。

 3,、工藝的過(guò)程控制

 （1）反應(yīng)終點(diǎn)監(jiān)控

 液相合成屬于常規(guī)有機(jī)合成,，一般可采用色譜法(如TLC法、HPLC法)監(jiān)測(cè),；固相合成偶合反應(yīng)的終點(diǎn)可采用茚三酮法,、三硝基苯磺酸（TNBS）法和四氯苯醌等監(jiān)測(cè)。二硫鍵連接的終點(diǎn)可用Ellman試驗(yàn)或HPLC法監(jiān)測(cè),。除上述方法外,，其他合適的方法也可以使用。

 （2）中間體質(zhì)量控制

 對(duì)于液相合成,，應(yīng)參照《化學(xué)藥物原料藥制備和結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》對(duì)中間體的質(zhì)量進(jìn)行控制,，特別要對(duì)縮合片段制訂合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（例如對(duì)比旋度,、熔點(diǎn)和純度等進(jìn)行控制），含有較長(zhǎng)序列的中間體還應(yīng)進(jìn)行結(jié)構(gòu)研究（例如氨基酸組成分析,、氨基酸序列分析、質(zhì)譜,、比旋度等）,。

 對(duì)于固相合成,，一般無(wú)中間體分離過(guò)程。但如果多肽從樹(shù)脂上切割后還需進(jìn)行后續(xù)反應(yīng),，對(duì)中間體的質(zhì)量也要進(jìn)行相應(yīng)控制,，同時(shí)還要進(jìn)行相應(yīng)的結(jié)構(gòu)研究。

 4,、分離和純化

 在多肽合成過(guò)程中,，會(huì)產(chǎn)生一些與目標(biāo)多肽結(jié)構(gòu)和性質(zhì)類似的雜肽，例如缺失肽,、非對(duì)映異構(gòu)體等，隨著肽鏈的增長(zhǎng),，可能存在的雜肽數(shù)量也隨之增加,。因此,，應(yīng)研究合適的純化方法將目標(biāo)肽從雜肽中分離出來(lái),。

 多肽純化方法的選擇需要綜合考慮多肽和雜肽的肽鏈長(zhǎng)短、極性和荷電性,、粗品的純度等?？捎糜诙嚯募兓姆椒òㄖ亟Y(jié)晶,、逆流分布,、電泳、離子交換色譜,、凝膠過(guò)濾色譜、反相色譜等,。目前已上市多肽藥物常見(jiàn)的純化方法是采用凝膠柱脫鹽后,，再用制備型高效液相色譜進(jìn)行純化,。

 對(duì)于選定的純化方法，應(yīng)提供詳細(xì)的驗(yàn)證性資料例如純化前后樣品的代表性色譜圖以說(shuō)明純化效果,。同時(shí)應(yīng)提供詳細(xì)的純化過(guò)程和相關(guān)的工藝參數(shù)。純化工藝的研究可結(jié)合質(zhì)量研究中雜質(zhì)分析方法的驗(yàn)證進(jìn)行,。

 純化后樣品的干燥方法也應(yīng)明確。常用的干燥方法為凍干法,，如果多肽對(duì)溫度不敏感,，也可采用室溫或高溫干燥。

 （二）結(jié)構(gòu)確證研究

 多肽結(jié)構(gòu)研究的主要目的是要說(shuō)明其氨基酸組成和序列是否正確,。多肽分子中如有半胱氨酸,，應(yīng)明確其狀態(tài)（氧化態(tài)或還原態(tài)），對(duì)含有多個(gè)半胱氨酸的多肽,，應(yīng)明確二硫鍵的正確連接位點(diǎn),。對(duì)于某些長(zhǎng)肽，可能還需要采用核磁共振,、園二色譜等方法對(duì)其空間結(jié)構(gòu)（例如二級(jí),、三級(jí)結(jié)構(gòu)）進(jìn)行研究。

 對(duì)于短肽,，采用元素分析、紅外光譜,、核磁共振譜,、氨基酸組成分析,、質(zhì)譜等常見(jiàn)方法，有時(shí)就足以說(shuō)明其結(jié)構(gòu)特征,。如果上述測(cè)試取得的信息難以進(jìn)行合理解析和歸屬,，應(yīng)進(jìn)行氨基酸序列測(cè)定,。

 對(duì)于中、長(zhǎng)肽應(yīng)進(jìn)行氨基酸組成和氨基酸序列分析,。闡明氨基酸序列的通用方法是Edman降解，這種方法是測(cè)定N端氨基酸的一種化學(xué)方法,；基于多種技術(shù)的質(zhì)譜，如快原子轟擊,、電噴霧,、場(chǎng)解析和激光解析質(zhì)譜,，可提供多肽的分子量及其序列信息，是對(duì)Edman降解的很好補(bǔ)充。

 中,、長(zhǎng)肽的結(jié)構(gòu)研究中,，盡管紫外光譜、紅外光譜,、核磁共振譜等能夠提供的可供分析的信息有限,，但在一些情況下,，上述研究還應(yīng)考慮進(jìn)行。例如,，在可獲得結(jié)構(gòu)確證對(duì)照品時(shí)，進(jìn)行上述譜圖的對(duì)比測(cè)定,，對(duì)于說(shuō)明所研制產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)有重要意義；對(duì)于全新結(jié)構(gòu)的多肽,，進(jìn)行上述研究也可為說(shuō)明多肽結(jié)構(gòu)提供輔助信息,，并為質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供信息,。

 對(duì)于含有20個(gè)以上氨基酸殘基的多肽，如不能直接確定其序列,，可根據(jù)多肽分子量大小及氨基酸組成特點(diǎn)，使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶（一般為肽鏈內(nèi)切酶）將多肽裂解成小片段,，再分析各小片段的序列,。

 當(dāng)多肽中含有非天然氨基酸及氨基酸衍生物時(shí),，結(jié)構(gòu)研究中應(yīng)予以證明。此時(shí),，應(yīng)在相應(yīng)的研究中考察這些非天然氨基酸及氨基酸衍生物的色譜行為。

 （三）制劑處方工藝研究

 了解合成多肽的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性對(duì)選擇適宜的劑型和合理的處方,、制備工藝有重要作用。在進(jìn)行多肽藥物的制劑處方工藝研究時(shí),，了解原料藥的色澤,、pH、pI,、比旋度,、立體化學(xué),、水分、溶解度,、油/水分配系數(shù)、溶劑化或水合狀態(tài)等,，特別是原料藥在固態(tài)和/或溶液狀態(tài)下（不同pH）、在光,、熱,、濕,、氧等條件下穩(wěn)定性情況等信息是十分必要的。另外,，多肽藥物的空間結(jié)構(gòu)與生物活性密切相關(guān),，任何導(dǎo)致多肽折疊結(jié)構(gòu)解體或松散以及損害立體結(jié)構(gòu)的因素都會(huì)影響其生物活性,，在處方工藝研究時(shí)對(duì)這些因素需要有全面的了解。

 1,、劑型的選擇

 對(duì)于全新結(jié)構(gòu)多肽藥物的劑型開(kāi)發(fā)，或者對(duì)已上市多肽制劑改變劑型時(shí),，全面研究并分析藥物的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性對(duì)于選擇合適的劑型是十分重要的,。

 與其他化學(xué)藥物相比,，合成多肽藥物多具有以下特點(diǎn)：（1）穩(wěn)定性差,包括存在化學(xué)和構(gòu)象不穩(wěn)定性；（2）易被胃腸道中的蛋白質(zhì)水解酶降解,；（3）體內(nèi)生物半衰期短，被快速消除或降解；（4）脂溶性差,，不易通過(guò)生物屏障等。因此,，多肽藥物通常選擇注射途徑給藥,，主要?jiǎng)┬蜑閮龈煞坩槃┖妥⑸湟?。?duì)于研究結(jié)果顯示藥物在溶液狀態(tài)下不穩(wěn)定的,，不宜選擇注射液等液體劑型。

 對(duì)于需頻繁注射給藥的合成多肽藥物,，存在患者使用不便、順應(yīng)性差等問(wèn)題,，選擇適宜的非注射給藥途徑也是此類制劑的研究熱點(diǎn),，目前研究最多的主要有鼻腔給藥,、肺部給藥、經(jīng)皮給藥和口服給藥等,。同時(shí)，為了減少給藥次數(shù),，也可考慮采用緩釋或控釋技術(shù),，使藥物在給藥部位緩慢釋放,，達(dá)到理想的治療效應(yīng)。

 2,、處方篩選及工藝研究

 合成多肽藥物處方篩選及工藝研究的重點(diǎn)是通過(guò)選擇適宜的處方和工藝條件，保證藥物的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性,。

 處方篩選通常通過(guò)選擇適宜的輔料提高制劑的物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性,。通過(guò)前期的研究工作,，詳細(xì)了解外界條件(如pH、溫度、光照,、氧濃度等)對(duì)多肽穩(wěn)定性的影響，已基本可以確定引起某一多肽藥物不穩(wěn)定的主要因素,。在處方設(shè)計(jì)中,，通過(guò)使用適宜的輔料來(lái)提高多肽藥物制劑的穩(wěn)定性是目前的主要方法,，盡管使用添加劑可以提高多肽藥物穩(wěn)定性的機(jī)制還不十分清楚。對(duì)于多肽藥物的二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)可能對(duì)藥物生物活性產(chǎn)生直接影響的,，選擇適宜的輔料可能會(huì)使藥物空間結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。研究中首先需注意多肽藥物和輔料相容性的考察,，可參照《化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》等進(jìn)行,。在此基礎(chǔ)上,，處方篩選可通過(guò)設(shè)計(jì)相應(yīng)的試驗(yàn)進(jìn)行，重點(diǎn)考察不同處方下藥物的有關(guān)物質(zhì)變化和活性的改變,。例如，對(duì)于制劑pH變化可能引起多肽凝聚沉淀,、使藥物變性失去生物活性的,，可以考察不同pH值的系列處方,，或添加不同穩(wěn)定劑（如抗氧劑）的處方，在不同條件下降解產(chǎn)物和活性等的變化情況,。

 多肽藥物生產(chǎn)過(guò)程可能會(huì)對(duì)其穩(wěn)定性和制劑質(zhì)量產(chǎn)生影響,，這些因素包括pH,、熱處理環(huán)節(jié),、凍干環(huán)節(jié)和剪切力、壓力等,，需注意對(duì)影響多肽藥物穩(wěn)定性的生產(chǎn)過(guò)程因素進(jìn)行深入的研究。由于多肽藥物特殊的理化性質(zhì),，無(wú)菌制劑一般不采用終產(chǎn)品熱壓滅菌的生產(chǎn)工藝，多數(shù)情況下采用過(guò)濾除菌的無(wú)菌生產(chǎn)工藝,。

 對(duì)制劑基本項(xiàng)目考察合格的樣品，可選擇兩種以上處方樣品進(jìn)行影響因素試驗(yàn),，重點(diǎn)考察藥物物理化學(xué)穩(wěn)定性和生物學(xué)穩(wěn)定性,，篩選出相對(duì)滿意的處方。同時(shí),，制劑處方和制備工藝也需根據(jù)后期臨床試驗(yàn)的需求和臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整,。

 （四）質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 1、質(zhì)量研究

 （1）原料藥的質(zhì)量研究

 合成多肽原料藥的質(zhì)量研究除參考一般化學(xué)藥物的研究思路進(jìn)行常規(guī)項(xiàng)目的研究外,，還應(yīng)根據(jù)合成多肽的結(jié)構(gòu)特征、制備工藝特點(diǎn)和生物學(xué)特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的研究,，研究項(xiàng)目一般包括：外觀性狀,、理化常數(shù),、鑒別、氨基酸組成分析,、水分,、反離子含量,、純度、有機(jī)溶劑和反應(yīng)試劑殘留量,、生物學(xué)安全性檢查、含量和/或活性效價(jià)測(cè)定等,。檢測(cè)方法研究和驗(yàn)證的基本思路和要求與已頒布的相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則相一致,。

 對(duì)于合成多肽藥物，除常規(guī)項(xiàng)目外,，理化常數(shù)一般需要關(guān)注其比旋度,、等電點(diǎn)（pI）,、溶解性（主要為水和緩沖液中）等。

 一般而言,，多肽藥物的常規(guī)檢查項(xiàng)目與其它化學(xué)藥物相同,。此外，與多肽藥物的結(jié)構(gòu)及合成特點(diǎn)相關(guān)的一些檢查項(xiàng)目,，例如氨基酸組成分析,、反離子（例如三氟醋酸或醋酸根）含量,、反應(yīng)試劑殘留量（例如從樹(shù)脂上裂解多肽使用了氫氟酸，需要檢查氟化物殘留量）等,，則需要在原料藥質(zhì)量研究中予以重視。

 相關(guān)肽檢查（或稱有關(guān)物質(zhì)檢查）是反映多肽化學(xué)純度的重要指標(biāo)之一,，根據(jù)多肽的理化性質(zhì),、分子大小,，可選擇合適的色譜、電泳等方法進(jìn)行,。短肽可參考一般化學(xué)藥品有關(guān)物質(zhì)檢查的研究思路選用適宜的方法,；長(zhǎng)肽的有關(guān)物質(zhì)檢查方法除常見(jiàn)的RP-HPLC外,，還可考慮使用高效離子交換色譜（HPIEC）、毛細(xì)管電泳技術(shù)等,，非解離條件下的高效分子排阻色譜（HPSEC）、聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）以及激光散射粒度測(cè)定等技術(shù)可用于聚合體/低聚體的檢查,。有關(guān)物質(zhì)檢查的方法學(xué)驗(yàn)證應(yīng)能證明所采用的方法可以有效分離目標(biāo)多肽與工藝雜質(zhì)（例如缺失肽等）,、降解產(chǎn)物（例如二硫鍵交換或氧化產(chǎn)物等）,、聚合物等,。一般應(yīng)考察兩種以上不同原理的方法，高效液相色譜法至少應(yīng)包括一種梯度洗脫方法,，并采用多肽粗品和強(qiáng)制降解試驗(yàn)等對(duì)方法的專屬性等進(jìn)行考察、對(duì)比,，此外還應(yīng)注意研究多波長(zhǎng)檢測(cè)的結(jié)果并選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)等。

 合成多肽因結(jié)構(gòu)特征不同于通常的小分子化學(xué)藥品,，純度檢查有時(shí)難以從根本上有效控制產(chǎn)品安全性,，需要進(jìn)行必要的生物學(xué)安全性檢查（如過(guò)敏試驗(yàn)、降壓物質(zhì),、升壓物質(zhì),、異常毒性等）以全面控制產(chǎn)品質(zhì)量、保證安全性,。此外,，根據(jù)產(chǎn)品具體情況,，對(duì)于長(zhǎng)肽,，有時(shí)尚需進(jìn)行免疫原性或抗原活性等生物特性的研究。

 含量測(cè)定是評(píng)價(jià)多肽質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,，理化方法測(cè)定其含量時(shí)稱為“含量測(cè)定”,，生物學(xué)方法或酶化學(xué)方法測(cè)定其效價(jià)時(shí)稱為“效價(jià)測(cè)定”,。對(duì)于短肽，理化方法測(cè)得的含量可以反映其有效程度時(shí),，首選簡(jiǎn)單,、通用的含量測(cè)定方法,；對(duì)于具有一定空間結(jié)構(gòu)才能發(fā)揮其活性的多肽,，需進(jìn)行生物學(xué)方法或酶化學(xué)方法測(cè)定藥物活性（效價(jià)）的研究，包括含量與活性的關(guān)系,、相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證等,。

 （2）制劑的質(zhì)量研究

 合成多肽制劑的質(zhì)量研究基本思路和要求可參照《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過(guò)程技術(shù)指導(dǎo)原則》、《化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》等相關(guān)內(nèi)容,，根據(jù)合成多肽的具體特點(diǎn),，在原料藥質(zhì)量研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合劑型特點(diǎn),、處方工藝以及臨床使用特點(diǎn),，重點(diǎn)研究所用輔料和制劑工藝對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響、制劑輔料和制劑產(chǎn)生的降解產(chǎn)物對(duì)檢測(cè)方法的影響以及與劑型相關(guān)的質(zhì)量要素,。研究項(xiàng)目一般亦應(yīng)包括性狀、鑒別,、檢查（安全性、均一性,、純度要求與有效性指標(biāo)等）,、含量或效價(jià)測(cè)定等幾個(gè)方面,。

 2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 合成多肽藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂原則,、要求與《化學(xué)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的規(guī)范化過(guò)程技術(shù)指導(dǎo)原則》是一致的,。即，在系統(tǒng)的質(zhì)量控制研究基礎(chǔ)上,，充分考慮藥品安全,、有效,、質(zhì)量可控的要求，以及生產(chǎn),、流通和使用等環(huán)節(jié)的影響,，確定能夠揭示、控制藥物內(nèi)在品質(zhì)的檢測(cè)項(xiàng)目,、分析方法和限度要求，如原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括氨基酸組成,、等電點(diǎn),、中長(zhǎng)肽的肽圖等,。合理可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量以保證臨床用藥的安全性和有效性，并有效地控制藥品批間質(zhì)量的一致性,。相關(guān)質(zhì)控項(xiàng)目的限度確定也應(yīng)參考相關(guān)的指導(dǎo)原則，例如對(duì)于有關(guān)物質(zhì)檢查限度的確定可以參考《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》,、仿制品種同時(shí)還可參考《化學(xué)藥品仿制研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等的原則性要求,，并結(jié)合產(chǎn)品本身的特性及臨床使用情況,，視具體情況而定。

 隨著藥物研發(fā)進(jìn)程的深入,，研究數(shù)據(jù)積累的不斷豐富,、方法學(xué)研究的完善和藥物研究技術(shù)的不斷發(fā)展,，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在不同研究階段需要不斷修訂和完善。

 （五）穩(wěn)定性研究

 合成多肽藥物穩(wěn)定性研究的基本原則應(yīng)遵循《化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的一般性要求,。

 與一般化學(xué)藥物相比，多肽藥物的穩(wěn)定性較差,。引起多肽藥物不穩(wěn)定的原因主要有水解,、氧化,、外消旋化、二硫鍵的斷裂及重排,、β消除、凝聚,、沉淀,、吸附等,。當(dāng)多肽處于溶液中或高濕下保存時(shí)，其降解或聚合的速度會(huì)比干燥條件下大為增加,。因此,，穩(wěn)定性研究應(yīng)根據(jù)多肽藥物穩(wěn)定性的特點(diǎn)合理選擇試驗(yàn)條件,、考察項(xiàng)目,。加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期留樣試驗(yàn)的試驗(yàn)條件應(yīng)依據(jù)藥物對(duì)溫度、濕度和光照等條件的敏感程度的考察（影響因素試驗(yàn)）基礎(chǔ)上選擇,；考察項(xiàng)目除常規(guī)項(xiàng)目（例如原料藥的比旋度、有關(guān)物質(zhì)和含量等）外,，根據(jù)具體情況,，可能還需要考察其生物活性的變化,。

 與其他化學(xué)藥物不同,，多肽藥物可能具有一定程度的表面活性，有與直接接觸藥品的包裝材料和容器發(fā)生吸附等相互作用的可能,，從而引起制劑效價(jià)、生物活性下降,。例如有些多肽分子能夠與玻璃表面的硅醇基發(fā)生相互作用,。因此,，在包裝材料的選擇方面需注意其與多肽藥物相互作用的研究，有些情況下可選擇特殊處理后的包裝容器,，如表面經(jīng)硅烷化處理的容器等。

 四,、名詞解釋

 非天然氨基酸：除自然界生物體中存在的氨基酸外,，其它由人工合成制備的氨基酸。

 反離子：和多肽形成離子對(duì)的帶有相反電荷的離子,。

 五,、參考文獻(xiàn)

 1.Guidance for Industry for the Submission of Chemistry,，Manufacturing，and Controls Information for Synthetic Peptide Substances,，F(xiàn)DA，1994,。

 2.合成多肽專題研討會(huì)會(huì)議紀(jì)要,，藥品審評(píng)中心,，2001。

 3.多肽藥物分析方法研究進(jìn)展,，葉曉霞,，俞雄,，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,，2003,，34（7）。

 六,、著者

 《合成多肽藥物藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組